柿屬植物DNA提取純化檢測技術體系的建立.pdf

1、柿屬植物為多年生木本植物，其葉片和其他組織中富含大量的多糖、多酚等代謝產物，使提取高質量的DNA比較困難。本課題以柿屬植物為材料，對芽、嫩葉、成熟葉、老葉、組培苗、花、萼片、一年生韌皮部、果實及其加工產品柿餅等不同來源的組織器官進行基因組DNA提取，試圖建立和完善一套不受時間以及取材部位限制的高質量DNA提取純化檢測技術體系。該技術的建立和優(yōu)化將為植物種質保存、鑒定和評價奠定堅實的基礎，也將為植物品種知識產權保護、基因文庫構建、分子輔助

2、育種和基因克隆重組、功能鑒定等的分子生物學下游實驗提供技術支持。主要的研究結果如下： 1．用堿裂解法、氯化芐提取法、高鹽低pH法、改良SDS法、改良CTAB法及試劑盒法等六種方法對前川次郎組培苗、芽、一年生韌皮部、嫩、葉、花、萼片、幼果、成熟葉、成熟果、老葉、柿餅等不同組織器官進行DNA提取，堿裂解法操作簡易省時，但提取效果不佳，其結果的準確性和可靠性較差。另外幾種DNA提取方法都在原有方法上作了一定的簡化，提取到的。DNA質量

3、尚佳，OD260／OD280在1.66-1.78之間，能夠用作PCR擴增，說明簡化操作流程對DNA質量要求不是太高的PCR反應是可行的。 2．基于CTAB法對鄂柿一號、前川次郎、君遷子等3份材料進行了DNA提取純化，結果表明：（1）不同時期采樣對DNA產率影響很大，隨葉片生長，DNA產率不斷下降，成熟葉片DNA產率僅為幼嫩葉片的16.7.19.4％；（2）在苯酚氯仿法、高鹽乙醚法、CTAB沉淀法等三種純化方法中以高鹽乙醚法效果最