伯克氏菌屬植物病原菌DNA條形碼檢測技術(shù)研究.pdf

1、植物病原細(xì)菌是一類非常重要的植物病原菌，目前已經(jīng)描述的植物病原細(xì)菌大約有30多個(gè)屬、650個(gè)種。大多數(shù)細(xì)菌會引起多種農(nóng)作物、經(jīng)濟(jì)作物以及花卉上的病害，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。伯克氏菌屬(Burkholderia)是一類重要的植物病原細(xì)菌，包括了8種不同植物病原菌，均會引起植物不同的病害癥狀，包括腐爛、枯萎和嚴(yán)重壞死等。因此，如何利用簡便、高效的檢測手段將病原菌檢測出來顯得尤為重要。DNA條形碼技術(shù)突破了傳統(tǒng)分類方法對模式標(biāo)本與分類經(jīng)驗(yàn)的過度

2、依賴，在鑒定過程中容易實(shí)現(xiàn)自動化和標(biāo)準(zhǔn)化，具有檢測過程快速、準(zhǔn)確、高通量等優(yōu)點(diǎn)，有效地滿足了口岸檢疫對現(xiàn)代檢測技術(shù)的要求，是傳統(tǒng)檢測鑒定方法的一個(gè)良好補(bǔ)充。
　　鑒于此，我們分別從NCPPB菌種庫、農(nóng)業(yè)微生物保存中心及中科院微生物所購得共72株伯克氏菌屬的菌株，對伯克氏菌屬的6條候選DNA條形碼基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測序，并從擴(kuò)增效果，測序成功率，種內(nèi)、種間遺傳距離，Barcoding gap及NJ樹幾個(gè)方面進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明rp

3、oD基因最適合進(jìn)行該屬內(nèi)種及致病變種的區(qū)分，gyrB基因可作為該屬分類鑒定的有效補(bǔ)充。
　　本文中所涉伯克氏菌屬的三個(gè)種及致病變種均被列入《中華人民共和國進(jìn)境植物檢疫性有害生物名錄》。這些檢疫性細(xì)菌一旦未能高效檢出，使其流入國門、傳播蔓延以至于在我國大面積發(fā)生，必將給我國的蔬菜、糧食生產(chǎn)、生態(tài)環(huán)境安全以及貨物的自由貿(mào)易等構(gòu)成嚴(yán)重威脅。
　　在進(jìn)境截獲的萬代蘭植株中，發(fā)現(xiàn)葉片上有局部黑褐色病斑，進(jìn)而葉片失綠、變黃，然后葉落。為

4、確定導(dǎo)致葉片局部黑褐色病斑、黃變的病原，首先采樣分離病菌，后通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生理生化鑒定、致病性測定以及Biolog鑒定等方法，對病原菌進(jìn)行了分離、鑒定和生物學(xué)研究，結(jié)果確定該致病菌為B.gladioli。為了進(jìn)一步確定該病原菌的致病變種，我們利用前文所總結(jié)出的適用于鑒定伯克氏菌屬的幾個(gè)條形碼基因?qū)┰嚲赀M(jìn)行PCR擴(kuò)增測序并建立NJ樹進(jìn)行分析比較，發(fā)現(xiàn)該病原菌與B.gladioli現(xiàn)有的三種致病變種的距離都相對較遠(yuǎn)，在種內(nèi)單獨(dú)