高脂飼料動員CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞參與動脈粥樣化發(fā)病機制研究.pdf

1、第一部分脂多糖動員骨髓CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞及其吞噬氧化修飾低密度脂蛋白形成泡沫細胞
　　 目的研究小鼠骨髓來源的未成熟CD11b+Gr-1+髓系前體細胞在急性炎性脂多糖(LPS)刺激下動員釋放,及其誘導分化成巨噬細胞樣細胞后吞噬氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)形成泡沫細胞。
　　 方法小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(5μg／g體重),24小時后采用流式細胞術分析骨髓,脾臟,和外周血中CD11b-Gr-1

2、+髓系前體細胞,CD11b+Gr-1+單核細胞,和CD11b-Gr-1+粒細胞的百分比的變化。體外泡沫細胞形成實驗取小鼠骨髓單個核細胞以DMEM培養(yǎng)基+胎牛血清(FBS)培養(yǎng),以粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)誘導分化48小時,加入100 mg／L氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育48小時以形成脂質負荷泡沫細胞。油紅O染色鑒定泡沫細胞。
　　 結果(1)脂多糖(LPS)腹腔注射可以顯著促進CD11b+Gr-1+

3、髓系前體細胞從骨髓動員并釋放到外周組織；脾臟和循環(huán)中CD11b+Gr-1+髓系前體細胞和CD11b+Gr-1-單核細胞顯著增加。(2)從骨髓分離的CD11b+Gr-1+髓系前體細胞以粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)誘導分化后形成單核／巨噬細胞樣細胞,繼而加入氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育,可以形成脂質負荷細胞(泡沫細胞)。油紅O染色可見泡沫細胞的胞漿中有紅染的大型脂滴,核被胞漿內脂滴擠壓在一側。
　　 結論

4、急性炎性刺激脂多糖(LPS)可以動員小鼠骨髓CD11b+Gr-1+髓系前體細胞的向循環(huán)和外周組織釋放。CD11b+Gr-1+髓系前體細胞可被誘導分化并吞噬氧化修飾低密度脂蛋白形成泡沫細胞。
　　 第二部分高脂飼料動員CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞參與動脈粥樣硬化形成的研究
　　 目的研究高脂飼料飼養(yǎng)ApoE-／-小鼠建立動脈粥樣硬化動物模型的過程中CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞的變化趨勢,以期揭示高脂血癥導致

5、動脈粥樣硬化的另一種可能的細胞機制。
　　 方法將12只雄性ApoE-／-小鼠隨機分為對照組(n=6)和模型組(n=6),分別給予普通飼料與高脂飼料飼喂。8周后酶法和免疫比濁法檢測血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白A-I(apoA-I)和載脂蛋白B(apoB)水平;HE染色觀察主動脈病理形態(tài)學改變；油紅O染色觀察內皮下間隙脂質沉積情況；流式細胞術分

6、析骨髓、脾臟、外周血中CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞的百分比,比較其與對照組之間的差異度。
　　 結果8周的高脂飼料使得ApoE-／-小鼠血脂水平顯著改變,動脈粥樣硬化斑塊明顯形成,CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞占骨髓單個核細胞比例顯著升高,并進一步被動員釋放到外周組織；導致循環(huán)中CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞顯著增加。結論高脂飼料飼養(yǎng)ApoE-／-小鼠能使CD11b+Gr-1+髓系抑制性細胞的生成顯著增加,并