抗CXCR4多肽抑制小鼠脈絡(luò)膜黑色素瘤肝臟微轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：脈絡(luò)膜黑色素瘤為眼部最常見的腫瘤，而肝臟轉(zhuǎn)移為其致死最主要原因之一，但其具體機(jī)制仍不清楚，目前認(rèn)為可能與化學(xué)趨化因子受體CXCR4有關(guān)。 CXCR4為化學(xué)趨化因子SDF-1(Stromal cell-derived factor-1)受體，為7次跨膜G蛋白耦聯(lián)受體，被SDF-1激活后可下調(diào)包括磷酯酰肌醇-3激酶，絲裂原活化蛋白激酶等一系列病理通道活性，從而調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。最早發(fā)現(xiàn)CXCR4與HIV感染有關(guān)。多項(xiàng)研究

2、表明CXCR4在乳腺癌、前列腺癌、肺癌及惡性黑色素瘤等多種惡性腫瘤中均有表達(dá)，且對(duì)腫瘤的遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移有著重要的促進(jìn)作用，故抑制CXCR4活性有可能減少腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。 T140為14氨基酸多肽，已被證實(shí)有較高的抗HIV能力，主要通過與SDF-1競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合CXCR4而抑制其活性。TN140003為其新改進(jìn)的復(fù)合物，較T140有更低的毒性及更高的穩(wěn)定性。 目的：分析抗CXCR4多肽TNl4003對(duì)小鼠脈絡(luò)膜黑色素瘤肝臟微

3、轉(zhuǎn)移的抑制作用。 方法：1．采用RT-PCR、Western blot及細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)CXCR4在B16LS9細(xì)胞及MetBl6LS9細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。 2．腫瘤細(xì)胞侵襲力分析：將B16LS9分別在SDF-1+TNl4003、SDF-1下培養(yǎng)，并將普通培養(yǎng)液組下培養(yǎng)作為對(duì)照組，采用分光光度計(jì)計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移至膠原膜內(nèi)的細(xì)胞，分別對(duì)各組進(jìn)行侵襲力分析。 3．建立小鼠脈絡(luò)膜黑色素瘤模型：將5×10<'5> cells/2.

4、5μl的B16LS9黑色素瘤細(xì)胞分別注入24只小鼠右眼脈絡(luò)膜上腔建立小鼠脈絡(luò)膜黑色素瘤模型。24只小鼠被隨機(jī)分為3組，組1與組2分別在種植B16LS9黑色素瘤3天前及當(dāng)天腹腔內(nèi)注射1mM多肽；組3在種植B16LS9黑色素瘤細(xì)胞當(dāng)天腹腔內(nèi)注射PBS。 4．對(duì)小鼠葡萄膜黑色素瘤原發(fā)病灶及肝轉(zhuǎn)移病灶進(jìn)行免疫組化分析：在種植腫瘤細(xì)胞后第7天摘除小鼠右眼，第28天處死小鼠并收集肝臟。進(jìn)行CXCR4、MMP-2、TGF-β<,2>、Ki-6