脂肪來源干細(xì)胞促血管化機(jī)制及膀胱缺損修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究低氧誘導(dǎo)(hypoxia precondition)人脂肪來源干細(xì)胞（human adipose-derived stem cells，ASCs）促血管化的相關(guān)機(jī)制；研究膀胱粘膜下層脫細(xì)胞基質(zhì)/絲素蛋白(bladder acellular matrix grafts/silk fibroin，BAMG-SF）體內(nèi)修復(fù)膀胱缺損的實(shí)驗(yàn)研究，包括：BAMG-SF雙層支架材料的生物相容性研究；研究 BAMG-SF雙層材料修復(fù)大面積膀胱

2、缺損的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；對(duì)比研究BAMG和BAMG-SF修復(fù)膀胱缺損的差異。
　　方法：①首先通過不同氧濃度和不同時(shí)間預(yù)置處理，對(duì)比相關(guān)基因的表達(dá)，確定最佳低氧預(yù)置濃度和時(shí)間；通過體內(nèi)成管實(shí)驗(yàn)和體外血管形成實(shí)驗(yàn)探討血管化機(jī)制。②制備雙層BAMG-SF支架,接種人脂肪來源干細(xì)胞（ASCs），體內(nèi)外培養(yǎng)后，觀察細(xì)胞支架復(fù)合情況。③取SD大鼠24只，隨機(jī)分成兩組，膀胱切開術(shù)組（對(duì)照組）6只，BAMG-SF組（實(shí)驗(yàn)組）18只。分別行膀胱切開術(shù)和膀

3、胱擴(kuò)大術(shù)。術(shù)后2周、4周、12周檢測(cè)膀胱再生情況。④取SD大鼠24只，隨機(jī)分成三組，膀胱切開術(shù)組（對(duì)照組）8只，BAMG組（實(shí)驗(yàn)組1）8只，BAMG-SF組（實(shí)驗(yàn)組2）8只。對(duì)照組行膀胱切開術(shù)，實(shí)驗(yàn)組行膀胱擴(kuò)大術(shù)。術(shù)后12周檢測(cè)并對(duì)比各組膀胱組織再生情況。
　　結(jié)果：①低氧預(yù)處理的策略是采用<0.1％ O2預(yù)置24小時(shí)，發(fā)現(xiàn)在ASCs中 SDF-1a/CXCR4與血管化密切相關(guān)。②ASCs在體內(nèi)外能覆蓋BAMG-SF表面并長(zhǎng)入支架

4、內(nèi)部，細(xì)胞材料復(fù)合良好。③隨著BAMG-SF修復(fù)時(shí)間的延長(zhǎng)，膀胱尿路上皮、平滑肌、血管的再生逐漸增多，到12周時(shí)達(dá)到膀胱切開術(shù)相同水平，而神經(jīng)修復(fù)的效果較差。④在12周時(shí)，BAMG-SF組在平滑肌、血管、神經(jīng)再生方面均優(yōu)于BAMG組。
　　結(jié)論：ASCs經(jīng)低氧預(yù)置后促進(jìn)了其促血管生成因子的分泌，增強(qiáng)了體外成管和體內(nèi)新生血管的形成，且通過VEGF-A和SDF-1a/CXCR4信號(hào)通路起作用；BAMG-SF雙層支架生物相容性好，適合A