晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)人脂肪來源干細(xì)胞功能紊亂的機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察糖基化人血清白蛋白(Advanced glycated human serum albumin，AGE-HSA)刺激對(duì)脂肪來源干細(xì)胞(Adipose tissue-derived stem cells，ADSCs)氧化應(yīng)激、增殖、遷移以及分泌細(xì)胞因子的影響，同時(shí)對(duì)糖基化終產(chǎn)物受體(receptorfor Receptor for Advanced Glycation Endproducts，RAGE)-絲裂原活化蛋白激酶(Mi

2、togen-Activated Protein Kinase，MAPK)-核因子-kB(nuclear factor-kB，NF-kB)通路以及節(jié)律基因參與相應(yīng)功能紊亂的分子作用機(jī)制進(jìn)行研究。 方法：取美容患者皮下脂肪組織，經(jīng)體外酶消離心分離細(xì)胞，通過流式細(xì)胞和誘導(dǎo)定向分化后免疫組化染色鑒定為人脂肪來源干細(xì)胞。給予不同濃度的AGE-HSA刺激，采用Western-blot觀察RAGE、MAPK及NF-kB通路的蛋白表達(dá)變化情況。

3、給予ERK和p38抑制劑阻斷相關(guān)信號(hào)通路，采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)檢測RAGE和節(jié)律基因Rev-erbα、Bmal1和Per2在上述處理后不同時(shí)間點(diǎn)的mRNA表達(dá)情況；oxyblot和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的變化；流式細(xì)胞儀和CCK8試劑盒檢測對(duì)細(xì)胞增殖的影響；transwell小室和刮痕實(shí)驗(yàn)檢測對(duì)細(xì)胞遷移功能的影響；ELISA檢測細(xì)胞因子分泌的變化。采用siRNA轉(zhuǎn)染ADSCs抑制節(jié)律基因關(guān)鍵分子Rev-erbα的表達(dá)，研

4、究Rev-erbα在AGE-HSA誘導(dǎo)的病理過程中的作用。 結(jié)果：AGE-HSA刺激可顯著抑制ADSCs遷移，但可促進(jìn)細(xì)胞增殖和分泌細(xì)胞因子，同時(shí)伴有胞內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)程度升高和RAGE-MAPK-NF-kB信號(hào)通路激活，而ERK和p38抑制劑以及瑞舒伐他汀可不同程度地抑制AGE-HSA的病理作用；AGE-HSA的病理作用伴有節(jié)律基因Rev-erbα、Bmal1和Per2的表達(dá)異常，而經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染抑制細(xì)胞Rev-erbα的表達(dá)