促紅細(xì)胞生成素對(duì)脊髓缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：缺血-再灌注損傷(Ischemia-reperfusioninjury，I-RI)是一種常見(jiàn)的脊髓損傷(spinalcordinjury，SCI)類(lèi)型，可引起嚴(yán)重的運(yùn)動(dòng)感覺(jué)障礙。近年來(lái)，其發(fā)病率有上升的趨勢(shì)，引起了眾多學(xué)者的注意和重視，就脊髓缺血再灌注損傷(Spinalcordischemia-reperfusioninjury,SCIRI)的防治進(jìn)行了廣泛深入的研究。目前研究表明，中樞神經(jīng)組織缺血-再灌注時(shí)，各種原因引起的神經(jīng)細(xì)

2、胞的凋亡或壞死，是其損傷機(jī)制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。如何減少神經(jīng)元壞死或凋亡，是SCIRI救治的關(guān)鍵因素之一。 針對(duì)缺血-再灌注損傷的機(jī)理，特別是其引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡或壞死，一些藥物被用于SCIRI的防治，主要包括自由基清除劑、鈣離子通道阻滯劑和白細(xì)胞粘附抑制劑等，均有一定的效果，但并非十分令人滿意。 EPO是一種作用于骨髓造血細(xì)胞，促進(jìn)紅系祖細(xì)胞增生、分化，最終成熟的內(nèi)分泌激素，但近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)EPO對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Centra

3、lnervoussystem，CNS)損傷有很強(qiáng)的保護(hù)作用而備受關(guān)注，實(shí)驗(yàn)證明EPO在CNS是一個(gè)新的有發(fā)展前景的神經(jīng)保護(hù)劑。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)SCIRI模型，觀察外源性rhEPO損傷脊髓的保護(hù)作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討。 方法： 1.建立大鼠SCIRI模型，應(yīng)用RT-PCR和免疫熒光組織化學(xué)方法觀察損傷脊髓內(nèi)EPOmRNA及EPO-RmRNA的表達(dá)情況。 2.建立兔SCIRI模型，并將動(dòng)物分為A：?jiǎn)渭兗顾钃p傷組

4、、B：rhEPO處理組、C：地塞米松處理組、D：正常對(duì)照組。采用Jacobs神經(jīng)功能評(píng)定方法，觀察各組動(dòng)物不同時(shí)相點(diǎn)神經(jīng)功能情況，通過(guò)HE染色及電鏡觀察各組脊髓組織的改變。 3.應(yīng)用TUNEL法觀察各組動(dòng)物脊髓的神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況。 4.采用免疫熒光組織化學(xué)方法觀察各組動(dòng)物脊髓的Bcl-2和Bax的表達(dá)變化情況。 結(jié)果： 1.大鼠SCIRI后48h，EPOmRNA及EPORmRNA表達(dá)的吸光度比值分別由正常

5、對(duì)照的0.107±0.017、0.289±0.023上調(diào)到0.173±0.032和0.725±0.109。比正常對(duì)照組增加61.7％和150.9％(P＜0.01)。免疫熒光結(jié)果顯示SCIRI后EPOR表達(dá)明顯增加。2.通過(guò)兔SCIRI模型，發(fā)現(xiàn)rhEPO處理組神經(jīng)功能評(píng)分明顯高于損傷組及地塞米松處理組。組織病理亦反映rhEPO處理組神經(jīng)細(xì)胞損壞情況好于上述2組。3.各組凋亡指數(shù)：A組：33.37±4.84，B組：9.41±2.86，C組

6、：26.85±5.38，顯然.rhEPO處理組細(xì)胞凋亡數(shù)量較損傷組及地塞米松處理組明顯下降(P＜0.01)。4.Bcl-2、Bax表達(dá)情況。Bcl-2：A組：12.57±3.60；B組：43.00±7.16；C組：17.29±3.99；rhEPO處理組Bcl-2表達(dá)明顯強(qiáng)于損傷組、地塞米松處理組(P＜0.01)。Bax：A組：45.28±6.82；B組：14.57±3.31；C組：36.29±7.63；rhEPO處理組Bax表達(dá)明顯弱于

7、損傷組及地塞米松處理組(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.脊髓組織中存在EPO及EPOR，且SCIRI后EPOR的表達(dá)較正常對(duì)照明顯上調(diào)。 2.外源性EPO能增強(qiáng)脊髓組織對(duì)缺血性損害的耐受能力，能明顯改善動(dòng)物因SCIRI所引起的神經(jīng)行為學(xué)改變和病理學(xué)變化。 3.細(xì)胞凋亡在SCIRI中發(fā)揮重要作用，外源性EPO能減輕因SCIRI所導(dǎo)致的脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 4.外源性EPO減輕SCIRI所導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞凋