促紅細(xì)胞生成素對(duì)離體大鼠心臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、研究背景：缺血和再灌注可嚴(yán)重破壞心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，阻礙心肌組織能量代謝，導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡和壞死，降低缺血再灌注損傷后心肌收縮和舒張功能。預(yù)處理(缺血或藥物)是目前研究最為廣泛，用于減輕心肌缺血再灌注損傷的主要手段。本研究通過建立大鼠離體心臟Langendorff模型，以重組人促紅細(xì)胞生成素預(yù)灌注作為處理手段，觀察thEPO預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用；同時(shí)，通過測(cè)定磷酸化PKCε、p38MAPK和ERK1/2的表達(dá)，探討thEP

2、O心肌保護(hù)的可能分子機(jī)制。
　　 第一部分促紅細(xì)胞生成素預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注損傷后心功能的保護(hù)作用
　　 目的：研究thEPO預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷后心肌收縮和舒張功能以及細(xì)胞活性的影響。
　　 方法：
　　 本實(shí)驗(yàn)采用全心缺血30分鐘，再灌注120分鐘模擬心肌缺血再灌注模型(I/R模型)。分別測(cè)定I/R組、thEPO(10IU/ml)+I/R組、chelerythrine+rhEPO+I/R組、S

3、B203580+rhEPO+ IUR組. PD98059+rhEPO+ I/R組/glibenclamide+rhEPO+ I/R組和L-NAME+rhEPO+I/R組(共7組)缺血前、再灌注30分鐘、再灌注60分鐘及再灌注120分鐘時(shí)的LVDP、RPP、+dP/dtmax、-dP/dtmax和CF以評(píng)測(cè)心肌收縮和舒張功能；應(yīng)用MTT比色法測(cè)定各組心肌缺血再灌注損傷后心肌細(xì)胞活度。
　　 結(jié)果：
　　 1.RhEPO預(yù)處

4、理大鼠心臟再灌注30分鐘的LVDP、RPP和±dP/dtmax，60、120分鐘的LVDP、RPP、±dP/dtmax和CF值以及OD550均較I/R組顯著升高。
　　 2.Chelerythrine和thEPO聯(lián)合預(yù)處理后，大鼠心臟再灌注30分鐘的LVDP、RPP和-dP/dtmax，60、120分鐘時(shí)的LVDP、RPP、±dP/dtmax以及心肌細(xì)胞活性均較thEPO處理組顯著下降。SB203580或PD98059與thEP

5、O聯(lián)合預(yù)處理后，再灌注30分鐘的LVDP、RPP和士dPidtmax，60、120分-鐘的LVDP、RPP、±dP/dtmax和CF以及OD550均較thEPO處理組顯著下降。
　　 3.Glibenclamide和thEPO聯(lián)合應(yīng)用后，大鼠心臟再灌注30分鐘的LVDP、RPP和士dP/dtmax，60、120分鐘的LVDP、RPP、±dP/dtmax和CF以及OD550均較thEPO處理組顯著下降。
　　 4.L-NA

6、ME和thEPO聯(lián)合應(yīng)用后，大鼠心肌其再灌注30分鐘、60分鐘及120分鐘的LVDP、RPP、±dP/dtmax、CF以及OD550各項(xiàng)指標(biāo)均較thEPO處理組顯著下降。
　　 結(jié)論：
　　 RhEPO預(yù)處理能顯著提高大鼠心肌缺血再灌注損傷的左心收縮和舒張功能，增加冠脈流量并提高心肌細(xì)胞存活率，其機(jī)制與PKC8、p38MAPK或ERK1/2的磷酸化激活有關(guān)，抑制PKC、p38MAPK或ERK1/2途徑活化均可完全阻斷th

7、EPO上述心肌保護(hù)作用。RhEPO預(yù)處理的心肌保護(hù)作用還與KATP通道的活化和開放有關(guān)，抑制KATP通道的開放可完全阻斷thEPO的心肌保護(hù)作用。此外，NO的合成和釋放也是介導(dǎo)thEPO預(yù)處理心肌保護(hù)的必要因素，阻斷NOS、抑制NO的合成和釋放可完全阻斷thEPO的心肌保護(hù)作用。
　　 第二部分促紅細(xì)胞生成素預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注損傷的急性心肌保護(hù)的機(jī)制研究
　　 目的：探討thEPO預(yù)處理心肌保護(hù)的相關(guān)分子機(jī)制。

8、>　　 方法：
　　 采用Westem-blot技術(shù)分別測(cè)定對(duì)照組、thEPO(10IU/ml)預(yù)處理、Chelerythrine+rhEPO預(yù)處理、SB203580+rhEPO預(yù)處理、PD98059+rhEPO預(yù)處理、Glibenclamidee+rhEPO預(yù)處理和L-NAME+rhEPO預(yù)處理(共7組)后心肌組織磷酸化PKC8、p38MAPK和ERKI/2的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.RhEPO(10I

9、U/ml)預(yù)灌注10分鐘后，心肌細(xì)胞顆粒成份(主要為線粒體、細(xì)胞核和胞膜成份)內(nèi)PKCs含量較對(duì)照組顯著升高，而細(xì)胞漿內(nèi)PKCε含量卻顯著減少。同時(shí)，磷酸化p38MAPK和磷酸化ERK1/2也均較對(duì)照組顯著升高。
　　 2.PKC抑制劑chelerythrine可完全阻斷PKC￡活化和轉(zhuǎn)位，心肌細(xì)胞顆粒成份內(nèi)PKC8含量較thEPO處理組顯著減少并回落至基礎(chǔ)水平。而p38MAPK抑制劑SB203580和ERK1/2抑制劑PD98

10、059對(duì)PKCε的活化和轉(zhuǎn)位無顯著影響。
　　 P38MAPK抑制劑SB203580可完全抑制磷酸化p38MAPK表達(dá)；chelerythrine可部分抑制磷酸化p38MAPK表達(dá)；而PD98059對(duì)p38MAPK磷酸化表達(dá)無顯著影響。
　　 ERK1/2抑制劑PD98059可完全抑制磷酸化ERK1/2的表達(dá)；chelerythrine可部分抑制磷酸化ERK1/2的表達(dá)；而SB203580對(duì)ERKI/2的磷酸化表達(dá)無顯著

11、影響。
　　 3.廣譜KATP通道抑制劑glibenclamide與thEPO聯(lián)合灌注對(duì)PKCε的活化和轉(zhuǎn)位無顯著影響，卻能部分阻斷磷酸化p38MAPK和ERKl/2的表達(dá)。
　　 4.廣譜一氧化氮合酶抑制劑L-NAME與thEPO聯(lián)合灌注均能部分減少PKC8、p38MAPK和ERK1/2的磷酸化激活。
　　 結(jié)論：
　　 RhEPO(10U/ml)預(yù)灌注可快速磷酸化激活PKC8，并促使其由細(xì)胞漿向細(xì)胞顆

12、粒成份內(nèi)轉(zhuǎn)移，并快速磷酸化激活p38MAPK和ERK1/2。PKC8是p38MAPK和ERK1/2的上游激酶，阻斷PKC￡可部分減少磷酸化p38MAPK和ERK1/2的表達(dá)。
　　 抑制KAIP通道的活化和開放并不影響PKCε的活化和轉(zhuǎn)位.卻能部分阻斷p38MAPK和ERK1/2的磷酸化表達(dá)?？梢姡?PKCε可能是KATP通道的上游激酶；而p38MAPK和ERK1/2是KATP通道的下游激酶，p38MAPK和ERK1/2的磷酸化