柴胡多糖對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能的影響.pdf

1、柴胡是我國的傳統(tǒng)中藥和常用中藥,主要包括傘形科多年生草本植物柴胡(北柴胡,BupleurumchinensisDC.)和狹葉柴胡(南柴胡,BupleurumscorzonerifoliumWilld),具有抗炎、治療腎病和自身免疫病的作用。小葉黑柴胡分布于我國的西北地區(qū)。在過去的研究中,我們從小葉黑柴胡根部提取出的柴胡多糖(Bupleurumpolysaccharides,BPs),對急性肺損傷(acutelunginjury,ALI)

2、和系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)具有良好的防治效果,并在離體研究中顯示出顯著的抗補(bǔ)體活性,但藥物對單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的作用未明。鑒于巨噬細(xì)胞在非特異性免疫系統(tǒng)中的重要性以及補(bǔ)體系統(tǒng)與巨噬細(xì)胞的緊密聯(lián)系,我們選取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞作為研究對象,研究柴胡多糖對巨噬細(xì)胞功能的影響,包括對其吞噬和趨化功能的影響;并在進(jìn)一步研究中利用熒光技術(shù)觀察柴胡多糖對巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響,更好地了解柴胡多糖可

3、能的作用機(jī)制。
　　第一部分柴胡多糖對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
　　目的:研究柴胡多糖對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響。方法:分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。分為兩大組,分別為空白對照和補(bǔ)體激活產(chǎn)物處理組。每組中分別給以溶劑和5個劑量的柴胡多糖(400、200、100、100、10、1μg/mL)。應(yīng)用熒光顯微鏡觀察各組巨噬細(xì)胞吞噬FITC標(biāo)記的大腸桿菌的情況,計數(shù)吞噬百分率和吞噬指數(shù),并測定吞噬上清中MDA和SOD含量。結(jié)果:補(bǔ)體激活產(chǎn)物可使

4、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)顯著高于空白對照組(p＜0.001);單用柴胡多糖(400、200、100、10、1μg/mL)能顯著促進(jìn)腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能(P＜0.001);但顯著抑制補(bǔ)體激活產(chǎn)物誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的吞噬功能增強(qiáng)(p＜0.001)。與空白對照組相比,補(bǔ)體激活產(chǎn)物能顯著升高M(jìn)DA含量,降低SOD含量(P＜0.01);而柴胡多糖對巨噬細(xì)胞吞噬液上清的MDA和SOD均無明顯影響(P＞0.05)。結(jié)論:柴胡多糖能促進(jìn)巨噬細(xì)胞的

5、吞噬功能,但對補(bǔ)體激活產(chǎn)物誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)有抑制作用,在此過程中不影響MDA、SOD含量。
　　第二部分柴胡多糖對巨噬細(xì)胞趨化功能的影響
　　目的研究柴胡多糖對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞趨化功能的影響。方法分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,進(jìn)行下列實驗。1)柴胡多糖的作用:a共培養(yǎng)部分:分為三大組,分別為空白對照、MCP-1處理組和補(bǔ)體激活產(chǎn)物處理組;每組中分別給以溶劑和5個劑量的柴胡多糖(BPs,終濃度400、200、100、10、1

6、μg/mL)與上述巨噬細(xì)胞趨化因子共培育;應(yīng)用transwell24孔趨化板檢測腹腔巨噬細(xì)胞的趨化功能和BPs對不同條件下細(xì)胞趨化作用的影響;b預(yù)處理部分:分組情況與a類似,但先經(jīng)各趨化因子預(yù)處理后再加BPs,檢測此時BPs對細(xì)胞趨化作用的影響;2)草烏甲素的作用:分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。分為三大組,分別為空白對照、MCP-1處理組和補(bǔ)體激活產(chǎn)物處理組。每組中分別給以溶劑和5個劑量的草烏甲素(bulleyaconitinA,BLA,終濃度

7、80、40、20、10、5ng/mL)。應(yīng)用transwell24孔趨化板檢測腹腔巨噬細(xì)胞的趨化功能和BLA對不同條件下細(xì)胞趨化作用的影響。結(jié)果MCP-1和補(bǔ)體激活產(chǎn)物可使腹腔巨噬細(xì)胞趨化指數(shù)顯著高于空白對照組(P＜0.001);1)共培養(yǎng)部分與預(yù)處理部分結(jié)果的變化趨勢類似:單用BPs(400、200、100、10、1μg/mL)對腹腔巨噬細(xì)胞的趨化功能有顯著促進(jìn)作用(P＜0.001),但顯著抑制MCP-1以及補(bǔ)體激活產(chǎn)物誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞

8、的趨化指數(shù)升高(P＜0.001),而且在對兩者的抑制程度方面有顯著性差異;2)單用BLA(80、40、20、10、5ng/mL)對腹腔巨噬細(xì)胞的趨化功能無顯著性影響(P＞0.05);但顯著抑制MCP-1以及補(bǔ)體激活產(chǎn)物誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞的趨化指數(shù)升高(P＜0.001)。結(jié)論1)柴胡多糖能促進(jìn)腹腔巨噬細(xì)胞的趨化功能,但能抑制趨化因子對巨噬細(xì)胞的趨化作用;2)BLA能抑制趨化因子對腹腔巨噬細(xì)胞的趨化作用,但對腹腔巨噬細(xì)胞無直接作用。
　　

9、第三部分柴胡多糖對巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
　　目的:研究柴胡多糖對巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。方法:分離小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。1)加入不同濃度(400、200、100μg/mL)的柴胡多糖,觀察在無刺激條件下,柴胡多糖對巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。2)加入LPS預(yù)處理后,再加入柴胡多糖,觀察柴胡多糖對LPS引起的巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高的影響。結(jié)果:1)在無刺激條件下,各濃度柴胡多糖能引起巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的振蕩;2)LPS預(yù)處