治療型VP22△-mE6△-mE7重組蛋白疫苗的表達(dá)與免疫學(xué)初步分析.pdf

1、宮頸癌是最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界上每年的新發(fā)病例約46萬(wàn)，每年約有25萬(wàn)人死于宮頸癌。在我國(guó)，每年宮頸癌的新發(fā)病例數(shù)超過(guò)13萬(wàn)，每年死于宮頸癌的婦女約有5萬(wàn)人。隨著研究的深入，宮頸癌與人乳頭瘤病毒的關(guān)系越來(lái)越被基礎(chǔ)研究者和臨床醫(yī)生所重視。近年來(lái)越來(lái)越多的科學(xué)家致力尋找宮頸癌的致病病因，并希望借此提高宮頸癌的治療和預(yù)防水平。 HPV是一種環(huán)狀雙鏈結(jié)構(gòu)的DNA病毒，由7800-7900堿基對(duì)組成，由3個(gè)基因區(qū)組成。其OR

2、Fs包含6個(gè)早期轉(zhuǎn)錄單位和2個(gè)晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)。E6和E7被認(rèn)為是HPV的癌基因，可分別與P53和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(retinoblastoma protein，PRB)結(jié)合，使這兩種抑癌基因失活。HPV的分類到目前為止，已發(fā)現(xiàn)和鑒定出超過(guò)100種不同類型，有54種可以感染生殖道黏膜。其中，高危型HPV—16、18型可在多數(shù)宮頸癌、一些肛管癌和陰道癌中檢測(cè)到。 有關(guān)HPV—16的治療型蛋白疫苗國(guó)內(nèi)外已有相關(guān)研究，治療型分子內(nèi)佐劑疫苗

3、的研究已成為當(dāng)今疫苗的研究熱點(diǎn)。VP22是Ⅰ型單純皰疹病毒(HSV—1)間層的主要蛋白，位于病毒衣殼與內(nèi)膜之間。VP22蛋白表現(xiàn)出在細(xì)胞間轉(zhuǎn)運(yùn)的特性，可將與其融合的蛋白分子高效地帶入其轉(zhuǎn)移的細(xì)胞。有研究者將VP22與腫瘤抗原人乳頭瘤病毒E7蛋白構(gòu)建到辛德比斯病毒RNA復(fù)制載體上，免疫小鼠后VP22—E7能夠誘導(dǎo)較強(qiáng)的E7特異性CDS+T細(xì)胞活性，同時(shí)有較明顯的抗E7的腫瘤活性。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，VP22的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)是由于該蛋白C末端的34

4、個(gè)氨基酸參與了細(xì)胞粘附，并且由于這段多肽富含帶有正電荷的堿性氨基酸殘基，它們可與帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜相互作用，然后將與之相融合的蛋白以非折疊方式跨膜進(jìn)入細(xì)胞，增強(qiáng)了與之融合蛋白與細(xì)胞的相互作用。 本研究將HSV—1 VP22蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)活性結(jié)構(gòu)域(protein transduction domain，PTD)與HPV—16的mE6△/mE7基因融合，使VP22△—mE6△/mE7融合蛋白在原核表達(dá)系統(tǒng)中得到較高效表達(dá)。在此基礎(chǔ)上摸索重

5、組蛋白純化工藝，并進(jìn)一步研究其在體外所誘發(fā)的細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)及在小鼠體內(nèi)的抗TC—1移植瘤生長(zhǎng)的生物學(xué)活性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，VP22△—mE6△/mE7蛋白除在小鼠體內(nèi)能夠激發(fā)產(chǎn)生高滴度特異性抗體外，也能在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)特異的細(xì)胞免疫反應(yīng)，該活性對(duì)HPV—16引發(fā)的腫瘤治療具有重要作用。經(jīng)VP22△—mE6△/mE7免疫后小鼠的脾淋巴細(xì)胞在體外被抗原再次刺激時(shí)，細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著高于免疫了mE6△/mE7蛋白和PBS的小鼠，表明可

6、在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)出針對(duì)該抗原的淋巴細(xì)胞特異性應(yīng)答。此外，TC—1細(xì)胞致瘤小鼠經(jīng)VP22△—mE6△/mE7免疫治療后表現(xiàn)出了較mE6△/mE7治療組更高的對(duì)TC—1特異性殺傷作用，使該蛋白具備了可能作為HPV—16型感染所致相關(guān)疾病的治療性疫苗的價(jià)值。本研究表明，VP22△—mE6△/mE7重組蛋白疫苗能誘導(dǎo)一定水平的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，致瘤小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)該蛋白疫苗在腫瘤治療中能起到一定的作用，這也為其它新型無(wú)佐劑治療性疫苗的