抗淋病LTB-PorB核酸疫苗與重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫的免疫增強(qiáng)效應(yīng)研究.pdf

1、目的：
　　將LTB-PorB核酸疫苗和重組蛋白疫苗鼻飼免疫BALB/c小鼠，分別分析其免疫活性，探討粘膜佐劑LTB能否輔佐PorB誘導(dǎo)更有效的特異性粘膜免疫，為經(jīng)粘膜途徑感染病原體的疫苗研制進(jìn)行有益探索；采用抗淋病LTB-PorB核酸疫苗與重組蛋白疫苗聯(lián)合（核酸初免-蛋白加強(qiáng)免疫）鼻飼免疫雌性BALB/c小鼠，探討其能否增強(qiáng)特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，為研制高效抗淋病疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.對本

2、課題組保存的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)/porB和pcDNA3.1(-)/ltB-porB進(jìn)行鑒定后，大量制備并純化；鼻飼免疫雌性BALB/c小鼠，檢測體液免疫和細(xì)胞免疫水平。
　　2.將本課題組保存的原核表達(dá)重組質(zhì)粒 pET-30a/ltB、pET-30a/porB和pET-30a/ltB-porB在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白；鼻飼途徑免疫雌性BALB/c小鼠，檢測體液免疫和細(xì)

3、胞免疫水平。
　　3.大量制備LTB-PorB核酸疫苗及重組蛋白疫苗；通過鼻飼途徑將核酸疫苗和重組蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加強(qiáng)（DNA prime-protein boost）聯(lián)合免疫雌性BALB/c小鼠，檢測體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。
　　結(jié)果：
　　1. LTB-PorB核酸疫苗（pcDNA3.1(-)/ltB-porB）免疫組小鼠生殖道黏膜產(chǎn)生的PorB特異性sIgA和血清IgG水平隨免疫時間呈上升趨勢，第8

4、 w sIgA A450值達(dá)0.470±0.088，明顯高于對照組（P<0.01），效價達(dá)1：320；第8 w IgG A450值為0.528±0.106，明顯高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS對照組（P<0.01），效價達(dá)1：1280，但與pcDNA3.1(-)/porB對照組（A450：0.511±0.094）無顯著性差異（P>0.05）。pcDNA3.1(-)/ltB-porB組脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)和

5、脾淋巴細(xì)胞誘生的IFN-γ、IL-4水平均明顯高于pcDNA3.1(-)/ltB、pcDNA3.1(-)和PBS對照組（P<0.05）。
　　2. LTB-PorB重組蛋白疫苗免疫組小鼠生殖道黏膜產(chǎn)生的PorB特異性sIgA水平隨免疫時間呈上升趨勢，第6 w A450值達(dá)0.663±0.095，明顯高于對照組（P<0.01），效價達(dá)1：1280；血清中PorB特異性IgG水平在第4 w達(dá)最高，A450值為0.598±0.062，明

6、顯高于LTB和蛋白溶解液（Solution Buffer）對照組（P<0.01），效價達(dá)1：5120，但與PorB對照組（A450：0.570±0.060）無顯著性差異（P>0.05）。LTB-PorB組脾淋巴細(xì)胞誘生的IL-4水平和脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)明顯高于LTB和Solution Buffer對照組（P<0.05），但脾淋巴細(xì)胞誘生的IFN-γ水平與對照組無顯著性差異（P>0.05）。
　　3. LTB-PorB核酸疫苗和重組

7、蛋白疫苗聯(lián)合免疫組免疫后第8 w，小鼠生殖道sIgA（A450：1.083±0.179，效價達(dá)1：2560）、血清IgG（A450：1.023±0.116，效價達(dá)1：20480）、脾淋巴細(xì)胞誘生的IL-4（357.58±34.44 pg/ml）和IFN-γ（261.85±29.92 pg/ml）水平均明顯高于對照組（P<0.01），小鼠脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)（SI：2.12±0.29）較對照組顯著增高（P<0.05）；核酸疫苗組、蛋白疫苗組

8、和聯(lián)合免疫組血清IgG亞類IgG2a/IgG1比值分別為1.678、0.455和0.693。
　　結(jié)論：
　　1. LTB-PorB核酸疫苗和重組蛋白疫苗通過鼻飼免疫雌性BALB/c小鼠，能誘生較高水平的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫，尤其是粘膜免疫，表明粘膜佐劑LTB可有效提高PorB誘導(dǎo)的特異性粘膜免疫應(yīng)答水平。
　　2. LTB-PorB核酸疫苗和重組蛋白疫苗聯(lián)合免疫誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答水平明顯優(yōu)于單獨(dú)的