沙眼衣原體Pmp蛋白的表達純化及其臨床檢測的研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，C.t)是目前國內(nèi)外引起性傳播疾病最常見的病原體。C,t D～K 型引發(fā)的泌尿生殖道感染在臨床上有不同的表現(xiàn)形式：有的有自覺癥狀、有的癥狀隱匿：有的可以很快治愈，有的則遷延反復，還有的可導致前列腺炎、不孕不育、異位妊娠、慢性盆腔炎等多種嚴重并發(fā)癥。C.t其他血清型可引起沙眼和性病性淋巴肉芽腫。預防和控制C.t感染已成為重要的公共衛(wèi)生問題。 衣原體多形外膜蛋白(polymor

2、phic membrane proteins，Pmp)是近年來新發(fā)現(xiàn)的位于衣原體外膜上的一個獨特的蛋白家族，推測它們可能具有黏附、分子轉(zhuǎn)運、信號傳導等細胞壁相關功能，并與衣原體的免疫逃逸和組織嗜性有關。已成為當今衣原體研究方面的熱點之一。目前國外的一些研究機構正在開展Pmp蛋白與C.t泌尿生殖道感染的相關性研究。 目的：克隆、表達、純化沙眼衣原體E型Bour菌株Pmp蛋白，并鑒定其免疫原性。檢測沙眼衣原體泌尿生殖道感染患者血清中

3、的Pmp蛋白的抗體。初步探討Pmp蛋白與沙眼衣原體泌尿生殖道感染的相關性。 方法：C.t E型Bour菌株經(jīng)細胞培養(yǎng)后提取染色體DNA作為模板，設計引物擴增出pmpG基因的N端片段(PmpG-N)，并將PmpG-N定向克隆到原核表達載體PET30a(+)中構建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到E.coli DH5 α中表達重組質(zhì)粒經(jīng)過鑒定的重組質(zhì)粒再轉(zhuǎn)化至E.coli BL21 中，在IPTG誘導下表達PmpG-N。通過His標簽的鎳離子交換層析

4、柱純化 PmpG-N，并用 Western-blot 方法鑒定其免疫原性。從臨床采集77例C.t泌尿生殖道感染患者和20例正常人的血清，采用Western-blot方法檢測血清中的Pmp蛋白抗體，分組比較Pmp蛋白抗體的陽性率，并同臨床資料進行相關性分析。 結果： (1)C.t E型BotJr菌株PmpG-N克隆成功，在 E.coli BL21 中得到表達。 (2)純化的PmpG-N，能夠與PmpG特異性抗體結合

5、，證實其具有免疫原性。 (3)Pmps-Ab陽性率在C.t感染組為90.20％，陰性對照組為20％，感染組明顯高于陰性對照組(p<0.05)。 (4)C.t感染組9種Pmp-Ab都可在病人血清中檢測到，但不同抗體的陽性率不同，PmpA～Pmpl分別為61.04％、88.31％、63.63％、28.57％、63.63％、75.32％、62.34％、77.92％和70.13％；其中PmpB-Ab陽性率最高88.31％，Pmp

6、D-Ab陽性率最低28.57％，明顯低于PmpB-Ab(p(0.05)。 (5)持續(xù)感染組與轉(zhuǎn)陰組9種Pmp-Ab陽性率均無顯著性差別。 (6)PmpD-Ab陽性率在女性患者為50％，男性患者為22.07％，女性明顯高于男性(p<0.05)；兩組其他8種 Pmp-Ab 陽性率無顯著性差別(p>0.05)。 (7)青年組9種Pmps-Ab陽性率均明顯高于中老年組(p<0.05)。 結論： (1)C.

7、t E型Botur菌株PmpG-N 成功克隆表達，且具有免疫原性，為今后Pmp蛋白的基礎和臨床研究奠定了基礎。 (2)沙眼衣原體Pmp蛋白具有免疫原性，C.t泌尿生殖道感染的病人可產(chǎn)生針對Pmp蛋白的抗體。 (3)不同的Pmp蛋白免疫原性有差別，推測PmpB免疫原性較強，PmpD免疫原性較弱。 (4)Pmp蛋白抗體對機體的免疫保護作用不強。 (5)Pmp蛋白的血清抗體存在個體差異和地區(qū)差異。 (6