電穿孔轉(zhuǎn)化沙眼衣原體建立衣原體載體實驗研究.pdf

1、目地：通過電穿孔將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到沙眼衣原體(CT)中，并由CT攜帶進入真核宿主細胞中，觀察重組質(zhì)粒在宿主細胞中的遺傳、表達，探索建立沙眼衣原體載體的方法和思路，為疾病的基因治療奠定基礎(chǔ)。 方法：分別用2.5kV和1.5kV電壓電擊經(jīng)電擊感受態(tài)制備的CT和重組pECFP-C1/U6-2質(zhì)粒的混懸液，擴增電擊過的CT，觀察重組pECFP-C1/U6-2質(zhì)粒標記基因產(chǎn)物——綠色熒光蛋白(GFP)的表達，并用PCR方法檢測重組基因插入序

2、列在是否在經(jīng)電擊的CT中存在。 結(jié)果：經(jīng)電擊的CT擴增培養(yǎng)48h后，倒置熒光顯微鏡觀察未見在宿主細胞中有綠色熒光。提取經(jīng)電擊轉(zhuǎn)化CT的基因組，酶切后PCR擴增重組的pECFP-C1質(zhì)粒插入序列，可見2.5kV電擊組中質(zhì)粒插入序列存在。 研究結(jié)論：CT能夠耐受電擊感受態(tài)制備及電擊過程，2.5kV電壓電擊轉(zhuǎn)化可將外源質(zhì)粒導(dǎo)入電擊感受態(tài)的CT中，進入CT的外源質(zhì)粒隨CT一起進行遺傳復(fù)制，但未發(fā)現(xiàn)外源質(zhì)粒在CT中表達的證據(jù)。為制