NELL-1蛋白對小鼠ATDC5細胞軟骨分化的調(diào)控機制和對人血管周細胞成骨分化作用的研究.pdf

1、NELL-1作為一種生長因子,對于骨骼的成正常發(fā)育以及骨和軟骨細胞分化過程中胞外基質(zhì)蛋白的產(chǎn)生都非常重要。本研究利用基因芯片和實時定量PCR技術(shù)篩選并鑒定出轉(zhuǎn)錄因子Nftc2是NELL-1的一個初級響應(yīng)基因。并且研究重組蛋白NELL-1對于ATDC5細胞系以及小鼠原代軟骨細胞的作用。Runx2是一種骨軟骨特異性的轉(zhuǎn)錄因子,利用腺病毒載體過量表達野生型和顯性負(fù)性突變(DN)的Runx2,發(fā)現(xiàn)Runx2有可能在NELL-1和Nfatc2之間

2、起著調(diào)節(jié)作用。NELL-1可以同時在轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)水平上誘導(dǎo)Nfatc2基因的表達并維持較短暫的時間,而這種誘導(dǎo)作用在DN-Runx2轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞中被顯著抑制,這表明Runx2對于Nftc2的誘導(dǎo)是必要的。細胞分化實驗揭示出NELL-1可抑制ATDC-5的細胞分化,盡管細胞增殖并未受到影響,但是軟骨分化的特異性基因的表達降低,并且軟骨節(jié)的形成與蛋白聚糖的積累也受到抑制。而利用siRNA技術(shù)敲除Nfatc2可以使得以上抑制效果得以恢復(fù)。為了進

3、一步闡明在體內(nèi)Nell-1、Runx2以及Nfatc2之間的關(guān)系,選取新生的和胚胎不同發(fā)育階段的小鼠,利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測Nell-1、Runx2以及Nfatc2在野生型和Nell-1缺陷型小鼠的股骨中的分布和表達情況。結(jié)果表明在新生小鼠的股骨中這三種蛋白在野生型小鼠的軟骨膜中共表達,而在.Nell-1缺陷型小鼠的軟骨膜中染色卻很微弱或者完全不存在。因此在NELL-1調(diào)節(jié)的體內(nèi)的或體外的骨軟骨細胞的分化過程中,Nfact2有可能起著