核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在兔慢性高眼壓視網(wǎng)膜上的表達(dá)及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、目的:探討兔慢性高眼壓視網(wǎng)膜上核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(Nucleafactor-κB)的表達(dá)及其與視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡的關(guān)系，為尋求臨床上視功能保護(hù)的有效方法提供新的思路。 方法:健康新西蘭大白兔51只，隨機(jī)分為4組：正常組、慢性高眼壓組(CH組)、慢性高眼壓對照組(CH對照組)、慢性高眼壓+PDTC干預(yù)組(CH+PDTC組)和慢性高眼壓+PBS對照組(CH+PBS組)。除正常組(3只)外，另四組再按觀察的時(shí)間點(diǎn)不同，隨機(jī)分為1周、2周、

2、4周和6周組，每時(shí)間點(diǎn)各3只。從CH組、CH+PDTC組和CH+PBS組兔前房各抽出0.2ml房水后注入2％甲基纖維素溶液0.2ml建立慢性高眼壓模型，同樣方法予CH對照組兔前房注入平衡鹽溶液0.2 ml作為對照。CH+PDTC組和CH+PBS組同時(shí)分別行玻璃體腔注射NF-κB特異拮抗劑吡咯醛二硫氨基甲酸酯(PDTC)溶液和PBS溶液50ul，每周一次直至觀察時(shí)間結(jié)束后摘除眼球，常規(guī)制備切片、HE染色、光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變、

3、免疫組織化學(xué)SP法觀察NF-κB的表達(dá)情況及原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL法)觀察細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果: 1．術(shù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無嚴(yán)重眼部并發(fā)癥出現(xiàn)。各組眼壓在實(shí)驗(yàn)前無明顯差異(P>0.05),CH組、CH+PDTC組和CH+PBS組術(shù)后眼壓均顯著升高(P<0.01)并維持在較高水平。 2．光鏡下見CH組視網(wǎng)膜細(xì)胞損傷隨高眼壓時(shí)間延長逐漸加重，由1周時(shí)的神經(jīng)纖維層變薄、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞固縮減少逐漸向視網(wǎng)膜外層累及，出現(xiàn)內(nèi)、外

4、核層細(xì)胞逐漸固縮消失形成空泡，視網(wǎng)膜全層萎縮變薄；CH對照組與正常組類似，未見明顯視網(wǎng)膜損傷表現(xiàn)；CH+PDTC組各時(shí)間段視網(wǎng)膜損傷較CH組相應(yīng)時(shí)間段加重；CH+PBS組各時(shí)間段視網(wǎng)膜變化與CH組相似。 3．NF-κB在正常組視網(wǎng)膜少量表達(dá)。隨慢性高眼壓時(shí)間延長，NF-κB在視網(wǎng)膜上的表達(dá)逐漸增強(qiáng)。1周時(shí)，CH組視網(wǎng)膜面密度值比正常組增高(P<0.05)，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞核呈棕黃色著染；2周時(shí)陽性表達(dá)累及少量內(nèi)核層細(xì)胞，面密度值與1

5、周時(shí)比具有顯著差異(P<0.05)；4周NF-κB陽性表達(dá)較2周時(shí)明顯加強(qiáng)(P<0.01)；6周時(shí)，NF-κB幾乎強(qiáng)烈表達(dá)于視網(wǎng)膜全層，面密度值繼續(xù)顯著增高(P<0.01)。CH+PDTC組視網(wǎng)膜NF-κB表達(dá)強(qiáng)度在各相應(yīng)時(shí)間段較CH組減弱。1周時(shí)面密度值與CH組1周時(shí)比較有顯著性差異(P<0.05)；2-6周時(shí)，分別較CH組相應(yīng)時(shí)間段明顯減弱(P<0.01)。CH+PBS組各時(shí)間段NF-κB表達(dá)與CH組相似(P>0.05)。CH對照組

6、NF-κB表達(dá)與正常組相似(P>0.05)。 4．正常組視網(wǎng)膜幾乎未見凋亡細(xì)胞。隨著高眼壓時(shí)間的延長，CH組視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞逐漸增多。1周時(shí)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞主要出現(xiàn)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，與正常組比較均有顯著性差異(P<0.05)；2周時(shí)凋亡細(xì)胞同時(shí)出現(xiàn)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和部分內(nèi)核層，與1周時(shí)相比有顯著性差異(P<0.05)：4周時(shí)凋亡細(xì)胞繼續(xù)增加(P<0.05)，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層及部分外核層均可見及；到6周凋亡細(xì)胞幾乎出現(xiàn)在視網(wǎng)膜全層，面

7、密度值較4周時(shí)有顯著差異(P<0.05)。CH+PDTC組視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡在1-4周時(shí)均較CH組相應(yīng)各時(shí)間段增多(P<0.05)，6周時(shí)與CH組6周相比有高度顯著性差異(P<0.01)，凋亡累及視網(wǎng)膜全層多數(shù)細(xì)胞。CH對照組與正常組相比無顯著差異(P>0.05)。CH+PBS組視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡與CH組相似(P>0.05)。 結(jié)論: 1．兔眼前房內(nèi)注入2％甲基纖維素可建立良好的慢性高眼壓動(dòng)物模型。 2．慢性高眼壓所致視

8、網(wǎng)膜損傷從內(nèi)層逐漸向外層累及，由最初的神經(jīng)纖維層變薄、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞減少逐漸加重最終導(dǎo)致視網(wǎng)膜全層萎縮變薄。 3．慢性高眼壓可致視網(wǎng)膜組織NF-κB活化，并隨高眼壓時(shí)間延長其表達(dá)逐漸加強(qiáng)。 4．慢性高眼壓促使視網(wǎng)膜組織細(xì)胞發(fā)生凋亡，并隨高眼壓時(shí)間延長凋亡細(xì)胞逐漸增多。 5．玻璃體腔注射NF-κB特異拮抗劑PDTC后慢性高眼壓視網(wǎng)膜上NF-κB表達(dá)明顯減弱，但細(xì)胞凋亡明顯增多。由此推測NF-κB可能具有抑制慢性高眼壓視