NF-κB在丙泊酚保護(hù)大鼠肝缺血-再灌注損傷中的作用的研究.pdf

1、目的： 本課題通過建立大鼠肝缺血/再灌注損傷模型，觀察丙泊酚對肝缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用；研究丙泊酚對大鼠肝缺血/再灌注損傷時NF-κB的轉(zhuǎn)錄水平、蛋白水平、功能水平的變化以及這些變化與丙泊酚對肝保護(hù)作用的相關(guān)性；闡明NF-κB在靜脈麻醉藥丙泊酚的肝臟保護(hù)作用機制中的地位和作用。 方法： 40只健康成年雄性SD大鼠，隨機數(shù)表法隨機平均分為4組：①假手術(shù)(N)組予假手術(shù)；②缺血/再灌注(IR)組予部分肝臟(左、中

2、、右葉)缺血1h，再灌注2h；③丙泊酚(P)對照組予手術(shù)后持續(xù)泵注丙泊酚10mg·kg-1·h-1；④丙泊酚處理(PIR)組予肝臟缺血/再灌注同時泵注丙泊酚。血清肝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase，AST)檢測肝功能變化；肝組織切片HE染色光鏡下觀察肝細(xì)胞變性、壞死及肝血竇淤等改變的情況；RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，

3、Reversetranscriptionandpolymerasechainreaction)檢測NF-κBP65亞基mRNA的變化；Westen-Blot檢測肝組織總NF-κB蛋白量的變化；免疫組織化學(xué)染色觀察肝組織NF-κBP65亞基向細(xì)胞核移位的情況，以了解NF-κB功能活化的變化。 結(jié)果： 一、肝缺血/再灌注后，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(

4、aspartateaminotransferase，AST)顯著升高(P＜0.05)，光鏡下見肝組織內(nèi)淤血明顯，有少量淋巴細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞濁腫、脂肪變性明顯，并可見部分肝細(xì)胞點、灶狀壞死區(qū)域，肝組織損傷嚴(yán)重，出現(xiàn)明顯的肝缺血/再灌注損傷。 二、大鼠肝缺血/再灌注損傷發(fā)生時，NF-κBmRNA的RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，NF-κB轉(zhuǎn)錄水平顯著升高(P＜0.05)，肝組織NF-κB的Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)，NF-κB蛋白量表達(dá)

5、水平也顯著升高(P＜0.05)，肝組織NF-κB免疫組織化學(xué)染色光鏡下觀察可見肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)均出現(xiàn)大量深褐色NF-κB染色顆粒，細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)的大量深褐色顆粒掩蓋了其原蘭色染色，NF-κB大量向細(xì)胞核內(nèi)移位，提示肝組織NF-κB的蛋白表達(dá)及其功能活化都增強了。 三、應(yīng)用丙泊酚后，再給予大鼠肝缺血/再灌注時，其血清ALT、AST酶升高程度受到顯著抑制(P＜0.05)，肝細(xì)胞變性、壞死及肝血竇淤血的程度也明顯減輕，提示丙泊酚

6、減輕了大鼠肝缺血/再灌注損傷。 四、大鼠肝缺血/再灌注損傷發(fā)生時同時應(yīng)用丙泊酚后，肝組織NF-κB的Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)，肝組織NF-κB蛋白表達(dá)的升高程度受到了顯著抑制(P＜0.05)，肝組織NF-κB免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核內(nèi)也有較多深褐色NF-κB染色顆粒，但較IR組明顯減少，細(xì)胞核的深褐色NF-κB染色顆粒明顯減少，基本呈蘭色，NF-κB表達(dá)水平的升高及其向細(xì)胞核內(nèi)的移位受到明顯抑制。