丙泊酚保護(hù)腎臟缺血再灌注損傷的分子機(jī)制研究.pdf

1、背景:腎臟的缺血再灌注損傷可導(dǎo)致急性腎功能衰竭，該病理生理過程常見于心血管手術(shù)，臟器移植手術(shù)，低血容量休克，膿毒性休克等ICU行機(jī)械通氣患者也可單獨(dú)發(fā)生或合并其他臟器衰竭，嚴(yán)重威脅患者生命。在麻醉或鎮(zhèn)靜過程中選擇合適的藥物對(duì)腎臟缺血再灌注損傷進(jìn)行加以保護(hù)尤為重要。
　　 丙泊酚是麻醉及ICU常用的鎮(zhèn)靜藥物，已有報(bào)道認(rèn)為可以減輕多種臟器（包括腦，心臟，肝臟等）的缺血再灌注損傷，丙泊酚對(duì)腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制還少有研

2、究，我們進(jìn)行了細(xì)胞及大鼠在體的研究以闡述相關(guān)保護(hù)作用及分子機(jī)制。
　　 第一部分:
　　 方法:使用Antimycin A耗竭ATP處理人腎小管上皮細(xì)胞(HKC)后更換正常基質(zhì)復(fù)制腎臟缺血再灌注損傷的細(xì)胞模型。研究分為:1）對(duì)照組;2）細(xì)胞與丙泊酚(20umol/L)共培養(yǎng)組;3）缺血再灌注損傷組;4）細(xì)胞與丙泊酚(20umol/L)共培養(yǎng)后給予缺血再灌注損傷組。Hoechst-33258染色檢測(cè)HKC細(xì)胞凋亡，MTT比

3、色法測(cè)定各組細(xì)胞活力，熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS含量，化學(xué)發(fā)光法測(cè)定各組細(xì)胞總SOD活性，TBA比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛，Western blot檢測(cè)HKC細(xì)胞caspase-3的表達(dá)，Electrophoretic Mobility Shift Assay(EMSA)檢測(cè)NF-κB的表達(dá)，激光共聚焦檢測(cè)HIF1-α的表達(dá)，Western-blot檢測(cè)HIF1-α表達(dá)量。
　　 結(jié)果:ATP耗竭處理后能引起SOD活性減低，清除

4、氧自由基減少，導(dǎo)致細(xì)胞活性氧(ROS)產(chǎn)生增加，直接產(chǎn)物MDA水平升高，同時(shí)Caspase-3活性明顯增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞存活數(shù)量減少。反映炎癥反應(yīng)的NF-κ B激活，丙泊酚預(yù)處理能夠使缺血/再灌注情況下的HKC細(xì)胞內(nèi)SOD活性的減低有所減輕，進(jìn)而能夠清除更多的氧自由基，使MDA和ROS產(chǎn)生減少，相比損傷組，丙泊酚預(yù)處理caspas-3活性及NF-κ B激活有部分抑制，使HKC細(xì)胞凋亡減少。單獨(dú)將細(xì)胞與丙泊酚共培養(yǎng)組HIF1-α表達(dá)

5、與空白對(duì)照組相比無差異，均處于低水平。
　　 結(jié)論:丙泊酚預(yù)處理對(duì)腎近曲小管細(xì)胞缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，其分子機(jī)制包括減輕氧自由基基損害，減少細(xì)胞凋亡，抑制炎癥反應(yīng)，但并沒有誘導(dǎo)細(xì)胞自我保護(hù)機(jī)制HIF-1α表達(dá)。
　　 第二部分
　　 方法:Wistar大鼠隨機(jī)分為5組:((I))對(duì)照組;(ii)假手術(shù)對(duì)照組;(iii)丙泊酚（25mg/kg/h）對(duì)照組;(iv)缺血再灌注組;(v)丙泊酚預(yù)處理后缺血再灌注組。

6、雙側(cè)腎動(dòng)脈夾閉60分鐘，再灌注24小時(shí)候分別取血及腎臟組織進(jìn)行損傷的評(píng)估及分子生物學(xué)分析。光鏡觀察腎臟病理改變，腎小管病理改變?cè)u(píng)分采用半定量方法，檢測(cè)大鼠腎功能（肌酐、胱抑素C），檢測(cè)腎組織SOD及MDA水平評(píng)價(jià)氧自由基損害程度。使用Western bloting及northen-blotting分析caspas-3活性，EMSA檢測(cè)NF-κ B的表達(dá)，Western bloting定量腎組織HIF-1α。
　　 結(jié)果:模型中缺

7、血再灌注使腎組織腎小管上皮細(xì)胞刷狀緣脫落，腎小管管腔擴(kuò)張，蛋白管型明顯增加，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，組織學(xué)評(píng)分較對(duì)照組顯著增高，腎功能指標(biāo)血清肌酐和胱抑素C顯著增加，同時(shí)腎組織SOD及MDA水平，caspas-3，NF-KB活性明顯增加。丙泊酚預(yù)處理顯著減輕了組織學(xué)損傷及血清腎功能指標(biāo)，與此同時(shí)腎組織SOD降低及MDA升高水平均較損傷組減輕。丙泊酚預(yù)處理部分抑制了缺血再灌注損傷導(dǎo)致的Caspase-3及NF-(K) B激活。丙泊酚輸注組HIF-