腎移植受者CYP3A4、CYP3A5、ABCB1、ABCC2和HLA-B-1502基因多態(tài)性與移植術(shù)后肝臟損害的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　 器官移植術(shù)后肝損傷發(fā)病率高達(dá)20％～50％，且與藥物暴露水平密切相關(guān)。環(huán)孢素(cycloporine，CsA)屬于鈣調(diào)神經(jīng)酶抑制劑，通過減少急性排斥反應(yīng)率和早期免疫損傷發(fā)生，對(duì)腎移植成功整體上有革命性的影響。然而，CsA具有治療指數(shù)窄、藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)個(gè)體差異大的特點(diǎn)。此外，移植術(shù)后肝損傷是臨床上免疫抑制劑減量甚至撤藥一個(gè)主要原因。因此，在器官移植領(lǐng)域，個(gè)體化免疫抑制治療仍然面臨巨大挑戰(zhàn)。治療藥物監(jiān)測(cè)(TDM)對(duì)降低

2、急性排斥反應(yīng)率和毒性反應(yīng)有一定作用，但它仍有一定的局限性:首先，TDM的起始劑量?jī)H根據(jù)體重計(jì)算，因此需要增加其他衡量指標(biāo);其次，通常需要數(shù)天至數(shù)周才能達(dá)到足夠的藥物暴露量，因此只能在用藥后開展TDM監(jiān)測(cè)，不能事先確定個(gè)體化治療的最佳劑量;第三，免疫抑制劑的體內(nèi)過程復(fù)雜，受多種因素影響。對(duì)于這些限制，有必要尋找其他的方法來達(dá)到個(gè)體化免疫抑制治療。最近，一些關(guān)于免疫抑制劑基因組學(xué)研究可能對(duì)未來合理用藥有重要意義。
　　 藥理學(xué)和藥物

3、基因組學(xué)研究表明，遺傳因素影響藥物代謝和分布過程，可能對(duì)初始劑量預(yù)測(cè)和不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有重要意義。據(jù)估計(jì)，20％～95％的藥物處置及效應(yīng)差異與遺傳因素有關(guān)。已證明細(xì)胞色素P450(CYP)同工酶的基因多態(tài)性對(duì)CsA藥動(dòng)學(xué)影響顯著，CYP3A5*3突變導(dǎo)致CYP3A5酶失活，已被證明與酶活性減少和毒性發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。雖然多態(tài)性檢測(cè)有助于在抗排斥治療開始前識(shí)別高危患者，但基因測(cè)試還無法應(yīng)用于日常臨床實(shí)踐，這可能與低突變率有關(guān)。近來的基因組

4、學(xué)研究大多集中在數(shù)目有限的藥物代謝酶、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)子或藥物靶標(biāo)分子編碼區(qū)，固定給藥劑量時(shí)，藥物代謝酶或轉(zhuǎn)運(yùn)子的基因變異可能與個(gè)體差異產(chǎn)生有關(guān)。
　　 目的：
　　 本課題研究基因多態(tài)性對(duì)腎移植術(shù)后肝損害發(fā)生的影響，進(jìn)而弄清肝損害的發(fā)生機(jī)理，為腎移植患者肝損害的防治和環(huán)孢素的合理應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 采用PCR-RFLP(聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)方法對(duì)339名腎移植患者進(jìn)行CYP3

5、A4*5、CYP3A4*6、CYP3A4*18B、CYP3A5*3、ABCB11236C＞T、ABCB12677G＞T/A、ABCB13435C＞T、ABCC21249G＞A單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型檢測(cè);采用Real-timePCR方法檢測(cè)所有入選患者的ABCC2基因rs717620(G/A)基因多態(tài)性。HLA-B*1502多態(tài)性的檢測(cè)采用PCR-SSP(PCRsequencespcificprimers)的方法。用熒光偏振免疫法檢測(cè)

6、腎移植患者的CsA血藥濃度，根據(jù)腎移植患者發(fā)生肝臟損傷的情況分為CsA致肝功異常組、其他原因肝功異常組和對(duì)照組。根據(jù)肝損害診斷標(biāo)準(zhǔn)(Hy'slawcriteria)，將患者分為移植術(shù)后肝損害組、肝功能異常組和對(duì)照組。所有入選的339名中國腎移植患者均詳細(xì)記錄性別、移植時(shí)年齡、身高、尸腎或親屬移植、體重和BMI、移植時(shí)間、糖尿病家族史、透析時(shí)間、乙肝和丙肝感染史等一般臨床資料，及移植術(shù)后7日、1、3、6、12、24、36和60個(gè)月的CsA

7、口服日劑量與血谷濃度、潑尼松和MMF劑量、肝腎功能、空腹血糖(FPG)等檢測(cè)結(jié)果。
　　 計(jì)量資料結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)、單因素方差分析和重復(fù)測(cè)量方差分析法比較各分組間的臨床資料差異。組間基因型和等位基因分布差異采用x2檢驗(yàn)。采用logistic回歸分析移植術(shù)后肝臟損害和CsA肝毒性發(fā)病的危險(xiǎn)因素。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 33

8、9位入組的腎移植患者中，237例被診斷為CsA肝毒性組。術(shù)后3月、6月和12月FPG比較，CsA肝毒性組的FPG均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。術(shù)后7日兩組間的CsA肝毒性組的CO明顯高于對(duì)照組(P＜0.05);術(shù)后7日、一月和三月，CsA肝毒性組的CO/D明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。logistic回歸顯示:術(shù)后6月高CO和術(shù)后1年的高FPG是CsA肝毒性發(fā)病的危險(xiǎn)因素
　　 339位入組的腎移植患者

9、中，125例被診斷為發(fā)生移植術(shù)后肝損害。結(jié)果顯示，術(shù)后7天、3月、6月和12月FPG比較，移植術(shù)后肝損害組患者的空腹血糖均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);移植術(shù)后7日、1月和3月，移植術(shù)后肝損害組的CO/D均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05);術(shù)后7日移植術(shù)后肝損害組的CO高于對(duì)照組(P＜0.05)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示:男性是移植術(shù)后肝損害發(fā)病的危險(xiǎn)因素。
　　 本研究中，未發(fā)現(xiàn)CYP3A4*5和CYP3A4*6突變等

10、位基因，CYP3A4*18B突變等位基因發(fā)生頻率為38.89％。與對(duì)照組相比，CsA致肝功異常組CYP3A4*18B/*18B分布頻率明顯降低（P＜0.01），CYP3A4*1/*1分布明顯增加(P＜0.05);其他原因肝功異常組的CYP3A4*1/*18B分布頻率明顯增加(P＜0.05);CsA致肝功異常組的CYP3A4*1/*1分布頻率亦明顯高于其他原因肝功異常組（P＜0.01）。腎移植術(shù)后一月和三月，攜帶*1/*1野生型的個(gè)體Cs

11、A谷濃度明顯高于*18B/*18B突變純合子個(gè)體(P＜0.05)。CYP3A4*18B與移植術(shù)后肝損害的發(fā)病密切相關(guān)，*18B在移植術(shù)后肝損害組的分布頻率明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 在339名腎移植患者中，CYP3A5*3突變等位基因頻率為73.54％。*3等位基因在CsA肝毒性組的分布頻率明顯高于對(duì)照組（P＜0.01）。CYP3A5*3突變與CsA肝毒性密切相關(guān)。與對(duì)照組相比，CsA致肝功異常組的CYP3A5*3/

12、*3分布頻率明顯增高（P＜0.05）。腎移植術(shù)后七天和一月，CYP3A5*3/*3組和*1/*3組的CsA血谷濃度均明顯高于*1/*1組（P＜0.05）。CYP3A5*3等位基因在移植術(shù)后肝損害組和對(duì)照組間的分布無明顯差異(P＞0.05)，*3突變等位基因?qū)δI移植術(shù)后免疫抑制劑肝損害發(fā)生無明顯影響。
　　 339例腎移植患者中，ABCB11236C＞T突變等位基因發(fā)生頻率為64.25％。CsA致肝功異常組與對(duì)照組間T等位基因分布

13、無明顯差異(P＞0.05);1236C＞T突變與環(huán)孢素肝毒性發(fā)病無明顯相關(guān)?；蛐头治鲲@示，1236C＞T多態(tài)性對(duì)CsA的CO無明顯影響。1236T等位基因在移植術(shù)后肝損害組和對(duì)照組間的分布無明顯差異（P＞0.05），1236T突變等位基因?qū)δI移植術(shù)后免疫抑制劑肝損害發(fā)生無明顯影響。
　　 ABCB12677G＞T/A突變等位基因發(fā)生頻率為51.54％。CsA致肝功異常組與對(duì)照組間T/A等位基因分布無明顯差異(P＞0.05);A

14、BCB12677G＞T/A突變與CsA肝毒性發(fā)病無明顯相關(guān)?；蛐头治鲲@示，ABCB12677G＞T/A多態(tài)性對(duì)CsA血谷濃度無明顯影響。2677G＞T/A等位基因在移植術(shù)后肝損害組和對(duì)照組間的分布無明顯差異（P＞0.05），2677G＞T/A突變等位基因?qū)δI移植術(shù)后免疫抑制劑肝損害發(fā)生無明顯影響。
　　 本研究中ABCB13435C＞T突變等位基因發(fā)生頻率為35.75％。CsA致肝功異常組與對(duì)照組間T/A等位基因分布無明顯差異

15、(P＞0.05);ABCB13435C＞T突變與環(huán)孢素肝毒性發(fā)病無明顯相關(guān)?；蛐头治鲲@示，ABCB13435C＞T多態(tài)性對(duì)CsA的CO無明顯影響。3435C＞T等位基因在移植術(shù)后肝損害組和對(duì)照組間的分布無明顯差異（P＞0.05），3435C＞T突變等位基因?qū)δI移植術(shù)后免疫抑制劑肝損害發(fā)生無明顯影響。
　　 ABCC2基因rs717620的突變A等位基因發(fā)生頻率為19.23％。與對(duì)照組相比，CsA致肝功異常組AA分布頻率明顯降低

16、(P＜0.05)，GG基因型分布明顯增加(P＜0.05);CsA致肝功異常組與對(duì)照組比較，A等位基因分布頻率明顯降低(P＜0.05);rs717620顯示與CsA相關(guān)的肝臟損害發(fā)生密切相關(guān)?；蛐头治鲲@示，rs717620位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)CsA的CO無明顯影響。rs717620位點(diǎn)多態(tài)性與移植術(shù)后肝損害的發(fā)病密切相關(guān)，A等位基因在移植術(shù)后肝損害組的分布頻率明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 ABCC21249G＞A的突變等位基因

17、發(fā)生頻率為10.72％。CsA致肝功異常組與對(duì)照組間A等位基因分布無明顯差異（P＞0.05）;ABCC21249G＞A在兩組間分布也無明顯差異（P＞0.05）。ABCC21249G＞A突變與環(huán)孢素肝毒性發(fā)病無明顯相關(guān)?；蛐头治鲲@示，ABCC21249G＞A多態(tài)性對(duì)CsA的CO和CO/D均無明顯影響。ABCC21249G＞A多態(tài)性與移植術(shù)后肝損害的發(fā)病密切相關(guān)，ABCC21249A在移植術(shù)后肝損害組的分布頻率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05

18、)。
　　 本研究中HLA-B*1502突變等位基因發(fā)生頻率為22.64％。CsA致肝功異常組與對(duì)照組間HLA-B*1502陽性等位基因分布無明顯差異（P＞0.05）;HLA-B*1502突變與環(huán)孢素肝毒性發(fā)病無明顯相關(guān)?；蛐头治鲲@示，HLA-B*1502多態(tài)性對(duì)CsA的CO和CO/D均無明顯影響。HLA-B*1502等位基因在移植術(shù)后肝損害組和對(duì)照組間的分布無明顯差異(24.0％vs20.0％，P＞0.05)，HLA-B*1

19、502突變等位基因?qū)δI移植術(shù)后肝損害發(fā)生無明顯影響。
　　 結(jié)論：
　　 CYP3A4*18B和CYP3A5*3基因多態(tài)性對(duì)CsA谷濃度有明顯影響，ABCB11236C＞T、ABCB12677G＞T/A、ABCB13435C＞T、ABCC21249G＞A和HLA-B*1502多態(tài)性對(duì)CsA的處置無明顯影響，也與CsA肝毒性和移植術(shù)后肝損害發(fā)病無明顯相關(guān)性。男性、術(shù)后六月高CsA血濃度、術(shù)后一年高FPG、CYP3A5*3和