鴨源沙門(mén)氏菌滅活疫苗及其免疫原性研究.pdf

1、隨著大型集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，規(guī)?；酿B(yǎng)禽生產(chǎn)中常伴有沙門(mén)氏菌病的發(fā)生，被感染的雛禽若不加以治療，重者死亡，耐過(guò)者終身帶菌，產(chǎn)出帶菌蛋，不僅造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，對(duì)公共衛(wèi)生的危害也不容忽視。由于耐藥性的產(chǎn)生，藥物治療效果差，可供選擇藥物的空間縮小。有效的疫苗接種對(duì)傳染病的預(yù)防起著舉足輕重的作用。目前，我國(guó)并沒(méi)有針對(duì)鴨沙門(mén)氏菌病的標(biāo)準(zhǔn)疫苗。本研究根據(jù)川渝地區(qū)鴨源沙門(mén)氏菌的血清型分布情況，通過(guò)動(dòng)物攻毒試驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比，篩選出一株血清型分布廣且毒力最

2、強(qiáng)的菌株作為研究對(duì)象。采用傳統(tǒng)方法制備蜂膠滅活疫苗，對(duì)試驗(yàn)鴨進(jìn)行免疫接種，從細(xì)胞免疫和體液免疫兩個(gè)方面來(lái)檢測(cè)該疫苗的免疫水平，對(duì)免疫效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期為鴨源沙門(mén)氏菌病的防控提供參考依據(jù)。本文所開(kāi)展的研究和取得的結(jié)果如下:
　　1本試驗(yàn)選取了12株鴨源沙門(mén)氏菌，在相同菌液濃度下對(duì)試驗(yàn)鴨進(jìn)行分組攻毒，篩選出死亡率最高、毒力較強(qiáng)的菌株:用30種沙門(mén)氏菌診斷血清進(jìn)行血清型鑒定為鴨源徹斯特沙門(mén)氏菌(1，4，[5]，12:e，h:e，n，x)

3、，細(xì)菌毒力試驗(yàn)測(cè)得該菌株的LD50為1×108.47 CFU。將該菌株作為疫苗菌株，研制出三個(gè)濃度(108 CFU/ml、109CFU/ml、1010 CFU/ml)的蜂膠滅活疫苗;5倍免疫劑量接種試驗(yàn)鴨無(wú)異常癥狀，表明該疫苗安全性好;經(jīng)攻毒保護(hù)試驗(yàn)得出108 CFU/ml、109 CFU/ml、1010 CFU/ml三個(gè)濃度組的保護(hù)率依次為50％、80％、100％，說(shuō)明疫苗濃度為1×1010 CFU/ml時(shí)能起到很好的保護(hù)作用。

4、>　　2本試驗(yàn)以6.64μg/ml蛋白質(zhì)濃度的DSC2013菌體裂解物為包被抗原，成功建立了檢測(cè)DSC2013抗體的間接ELISA方法，其最佳的血清稀釋倍數(shù)為400倍，酶標(biāo)羊抗鴨IgG的最適工作濃度為2.50μg/ml;對(duì)鴨抗鴨瘟、多殺性巴氏桿菌、大腸桿菌、鴨疫里氏桿菌、葡萄球菌及鴨病毒性肝炎病毒等陽(yáng)性血清檢測(cè)結(jié)果均為陰性;阻斷試驗(yàn)結(jié)果為陰性;板內(nèi)和板間重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)分別為1.10％～2.64％、1.53％～2.67％。
　

5、　3本試驗(yàn)利用DSC2013滅活疫苗（濃度為1×1010 CFU/ml）免疫接種試驗(yàn)鴨，比較對(duì)照組和免疫組在細(xì)胞免疫水平和體液免疫水平上的差異，綜合評(píng)價(jià)DSC2013蜂膠滅活疫苗的免疫原性:
　　(1)用CCK-8細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒檢測(cè)鴨淋巴細(xì)胞的體外增殖活性。脾臟淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)，在ConA刺激下免疫組細(xì)胞增殖能力明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，二免組增殖能力比一免組高(P＜0.05);外周血淋巴細(xì)胞分別在ConA和疫苗抗原的刺

6、激下，二者均能刺激淋巴細(xì)胞提高其增殖活性，免疫組的增殖能力明顯比對(duì)照組高(P＜0.05);結(jié)果表明，疫苗免疫可以提高鴨淋巴細(xì)胞的體外增殖活性。
　　(2)間接ELISA試劑盒檢測(cè)鴨免疫前、后3d、7d、10d、15d、20 d、25 d的外周血液中IL-4和IFN-γ的含量。免疫組的IL-4和IFN-γ含量在免疫3d后呈現(xiàn)出逐漸升高的過(guò)程，與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05);二免組在免疫后20 d出現(xiàn)波峰，明顯高于一免組(P＜0

7、.01)。
　　(3)利用染色計(jì)數(shù)法檢測(cè)鴨免疫前、后7d、15d、25 d白細(xì)胞的吞噬活性。免疫后三個(gè)組的PP和PI值都呈上升趨勢(shì)，但免疫組升高的幅度比對(duì)照組更明顯(P＜0.05);免疫后15d，三個(gè)組差異不明顯(P＞0.05);直至25 d后，對(duì)照組和一免組開(kāi)始下降，二免組保持較高水平。
　　(4)間接ELISA方法用于檢測(cè)疫苗免疫后的血清抗體水平。免疫前鴨血清中具有一定的抗體水平，免疫后3d三組均呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)，免疫組的