2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩65頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、沙門氏菌(Salmonella)在全世界范圍內(nèi)廣泛分布,在所有的人和動物致病菌中占主要地位。其血清型種類大約有2600多種,具有廣泛的宿主,能夠感染人和多種動物引起沙門氏菌?。⊿almonellosis),人被沙門氏菌感染多與被污染的動物制品有關(guān)系。因此,該病在獸醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)上具有重要的意義。
  亞單位疫苗具有安全性高、純度高、產(chǎn)量高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。近年來,外膜蛋白在新型診斷試劑和新型疫苗等方面出現(xiàn)的潛在性作用吸引了人們的特別關(guān)

2、注。BtuB、TolC、OmpX是革蘭氏陰性細菌的三個外膜蛋白,且在不同沙門氏菌中具有較高的保守性,能夠引起宿主強烈的體液免疫和細胞免疫反應(yīng),是亞單位疫苗的候選蛋白。
  因此,本研究利用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達豬沙門氏菌外膜蛋白BtuB、TolC、OmpX,并研制新型的豬沙門氏菌亞單位疫苗,同時利用小鼠模型評價了其免疫原性和免疫保護性。主要完成的研究工作如下:
  1.比較和分析btuB、tolC、ompX基因核苷酸序列

3、>  通過NCBI(National Center for Biotechnology Information)數(shù)據(jù)庫,下載多種致病性沙門氏菌的btuB、tolC、ompX基因核苷酸序列,并進行Blast分析,發(fā)現(xiàn)btuB、tolC、ompX基因核苷酸序列在豬霍亂沙門氏菌C.500、豬霍亂沙門氏菌SC-B67、鼠傷寒沙門氏菌LT2、腸炎沙門氏菌EC20111175、雞白痢沙門氏菌S06004等菌株中的同源性均大于99%,可能在交叉免疫保

4、護方面具有良好的效果。
  2.重組質(zhì)粒pET-28a-btuB、pET-28a-tolC、pET-32a-ompX的構(gòu)建
  利用基因工程的方法,首先克隆btuB、tolC、ompX基因,進行純化回收;用BamHⅠ、SacⅠ分別雙酶切btuB、tolC、ompX基因片段,經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收,連接到經(jīng)同樣限制性內(nèi)切酶處理過的pET-28a、pET-32a質(zhì)粒上,連接成功的pET-28a-btuB、pET-28a-tolC、

5、pET-32a-ompX經(jīng)過雙酶切鑒定和測序鑒定,表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。
  3. BtuB、TolC及OmpX蛋白的表達、分離及純化
  通過大腸桿菌表達系統(tǒng)成功表達出BtuB、TolC及OmpX蛋白,并通過Western blot檢測進一步驗證其正確性。BtuB、TolC及OmpX蛋白表達在包涵體中,經(jīng)過對表達條件的多次摸索后,蛋白仍然表達在包涵體中,故進行了包涵體的分離與純化,同時對包涵體蛋白的分離純化方法進行了摸索與

6、改進,發(fā)現(xiàn)“尿素法”得到的包涵體蛋白純度較高但濃度較低,然后“SKL法”得到的包涵體蛋白濃度較高但純度較低。經(jīng)過“尿素法”純化后得到的目的蛋白通過BCA法測定其濃度,BtuB、TolC及OmpX蛋白濃度分別為:0.79mg/mL、0.82mg/mL、0.49mg/mL。
  4. BtuB、TolC、OmpX蛋白亞單位疫苗的制備及免疫效力的研究
  將目的蛋白用1×TE Buffer稀釋到濃度約為500μg/mL,與等體積的

7、弗氏佐劑進行充分乳化,制成BtuB、TolC、OmpX亞單位疫苗。每只小鼠免疫劑量為200μL,大約50μg蛋白,免疫2次。小鼠的免疫原性試驗的結(jié)果表明,這三種亞單位疫苗在小鼠體上均能誘導(dǎo)產(chǎn)生很好的抗沙門氏菌BtuB、TolC、OmpX蛋白的ELISA抗體,同時這三種蛋白都能誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的脾淋巴細胞增殖。二免14d后用鼠傷寒沙門氏菌CVCC541進行攻毒,攻毒劑量接近6×LD50(約為5.76×106CFU/mL)。攻毒后觀察14d,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論