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文檔簡介
1、本研究開展了建立基于脂多糖的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(LPS-ELISA)和基于鴨疫里默氏菌(RA)超聲裂解物的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(PRO-ELISA)檢測血清1型鴨疫里默氏菌(RA-1)抗體、鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋種鴨后其種蛋卵黃及6日齡雛鴨血清中LPS-ELISA抗體/PRO-ELISA抗體/試管凝集試驗(yàn)抗體的消長規(guī)律、雛鴨母源抗體水平與抵抗RA-1強(qiáng)毒攻擊的關(guān)系評(píng)估等,獲得如下結(jié)果:
1、檢測RA-1抗體的LPS-
2、ELISA和PRO-ELISA方法建立
LPS-ELISA∶ LPS最佳包被濃度為12.50 ng/μL,血清最佳稀釋濃度為1∶800,酶標(biāo)二抗最佳稀釋度為1∶400。
PRO-ELISA∶ RA超聲裂解抗原最佳包被濃度為1.56 ng/μL,血清最佳稀釋濃度為1∶400,酶標(biāo)二抗最佳稀釋度為1∶800。
以上兩種方法與經(jīng)典的RA試管凝集試驗(yàn)具有較好的平行關(guān)系。
2、鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗免疫種鴨
3、后抗體傳至卵黃及下一代6日齡雛鴨的消長規(guī)律
60只4月齡產(chǎn)蛋種鴨注射0.5mL鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗,于第3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36天收集當(dāng)天所產(chǎn)的鴨蛋,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每次收集30個(gè),其中10個(gè)鴨蛋提取卵黃抗體,20個(gè)鴨蛋用來孵化雛鴨,每批次雛鴨孵育出來后于6日齡采集血液并分離血清,設(shè)60只4月齡產(chǎn)蛋種鴨不免疫疫苗對(duì)照。用試管凝集試驗(yàn)和兩種不同的ELISA方法檢測抗體的水平,結(jié)果表明:疫苗免疫
4、種鴨后第6天即可檢測出卵黃抗體,第27天抗體水平達(dá)到最高,第33天后抗體水平開始緩慢降低,血清抗體水平與卵黃抗體水平變化規(guī)律基本一致,但血清抗體明顯偏低,對(duì)照組呈陰性。
3、鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗免疫種鴨后下一代雛鴨母源抗體消長規(guī)律與雛鴨抵抗大劑量RA-1強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)力
120只4月齡產(chǎn)蛋種鴨注射0.5mL鴨傳染性漿膜炎滅活疫苗,收集免疫后第27-33天鴨蛋孵育雛鴨,設(shè)80只4月齡產(chǎn)蛋種鴨不注射疫苗為對(duì)照組。開展兩
5、項(xiàng)試驗(yàn):(1)抗體檢測:采集1、3、6、9、12、15、18、21日齡雛鴨血清,用試管凝集試驗(yàn)和兩種不同的ELISA方法檢測抗體的效價(jià);(2)攻毒保護(hù)試驗(yàn):選3、6、9、12、15、18、21日齡雛鴨,進(jìn)行攻毒,每個(gè)日齡選8只作為試驗(yàn)組,每只雛鴨肌肉注射0.5mL含菌量為109CFU/mL RA-1強(qiáng)毒;對(duì)照組每個(gè)日齡選6只雛鴨注射相同劑量菌液;空白組每個(gè)日齡選4只雛鴨注射等量生理鹽水。結(jié)果表明:雛鴨體內(nèi)母源抗體隨著日齡增長呈下降趨勢,
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