氧化低密度脂蛋白對小鼠骨髓源性平滑肌祖細胞 CXCR4表達的影響.pdf

1、背景：基質(zhì)細胞衍生因子（stromal cell derived-factor1,SDF-1）又名CXCL12 或前B刺激因子，屬于CXC 族趨化因子成員，同基因編碼兩種蛋白：SDF-1α和SDF-1β。SDF-1 主要在骨髓基質(zhì)細胞及骨髓內(nèi)皮細胞表達，在造血干細胞中也有相應(yīng)的表達。SDF-1 唯一的受體CXCR4是一個有七個跨膜結(jié)構(gòu)域的G 蛋白耦聯(lián)的受體，在造血干/祖細胞表面及內(nèi)皮祖細胞表面高表達，新近研究表明CXCR4 也在骨髓間充

2、質(zhì)細胞（marrow stromal cells;MSC）上表達。文獻報道，在心肌梗死后的心肌中立即出現(xiàn)了SDF-1的上調(diào)并導致過表達CXCR4的MSC 向損傷心肌遷移。在Zhang等的研究中表明CXCR4+的MSC 參與了新生血管的生成并分化為新的心肌細胞，動物實驗表明SDF-1/CXCR4 軸的相互作用在心肌修復時對MSC的募集起著重要作用，在SDF-1和/或CXCR4 敲除老鼠的研究中表明該軸在細胞分化中起著重要作用。MSC是骨髓

3、微環(huán)境中重要細胞成分，具有向各種細胞分化的潛能，且有文獻報道MSC可向平滑肌祖細胞(Smooth muscle progenitor cell;SPC)分化。骨髓源性MSC 或SPC是動脈粥樣硬化（atherosclerosis,As）斑塊中平滑肌細胞重要來源之一。那么在As的斑塊形成及修復過程中SDF-1/CXCR4 軸是否能募集MSC 或骨髓源性的SPC的歸巢致?lián)p傷動脈，參與As形成尚未見報道。
　　 目的：檢測As危險因子

4、氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein；ox-LDL）對小鼠骨髓源性SPC SDF-1 受體CXCR4表達的影響，探討SDF-1/CXCR4對骨髓源性SPC 歸巢至受損動脈的作用。
　　 方法：小鼠骨髓源性SPC與ox-LDL（50μg/mL）共同孵育，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法（Reverse transcription-polymerase chian reaction;RT-PCR）

5、檢測SPC CXCR4 mRNA的表達，免疫印跡法（immunoblotting）及免疫熒光染色和共聚焦激光掃描顯微鏡分析（immunofluorescence staining and confocal laser scanning microscope analysis）檢測SPC CXCR4 蛋白表達，觀察ox-LDL對SPC表達CXCR4的時效關(guān)系。
　　 結(jié)果：未給予ox-LDL刺激的SPC有基礎(chǔ)水平的CXCR4表達，

6、50μg/mL的ox-LDL刺激SPC 0-72h，隨刺激時間的延長，CXCR4表達逐漸增強，36h 達峰值，其mRNA和蛋白水平分別為基礎(chǔ)水平的5.73 倍和5.02 倍,差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05），隨后逐漸下降，但仍高于基礎(chǔ)水平。免疫熒光染色和共聚焦激光檢測并觀察到在0h時即未給予ox-LDL 刺激時SPC的胞質(zhì)和細胞膜表面有少量的CXCR4表達，隨著作用時間的延長，CXCR4的表達量逐漸上調(diào)且在36h時其在SPC的胞質(zhì)和細