嚴(yán)重?zé)齻笫箅跫『说蛲黾耙葝u素治療對(duì)其作用的研究.pdf

1、目的：嚴(yán)重?zé)齻颊咄殡S呼吸功能障礙，當(dāng)并發(fā)急性呼吸功能衰竭時(shí)治療效果差，是燒傷早期的主要死因。膈肌是呼吸功能的主要?jiǎng)恿碓?，呼吸肌萎縮則對(duì)呼吸功能有重要影響。既往研究表明，骨骼肌核凋亡是嚴(yán)重?zé)齻笏闹趋兰∥s的重要機(jī)制之一，同時(shí)胰島素對(duì)四肢骨骼肌凋亡起到部分抑制作用。本研究擬在此基礎(chǔ)上探討嚴(yán)重?zé)齻箅跫∥s、核凋亡情況;死亡受體通路在膈肌核凋亡中扮演的角色;胰島素治療對(duì)嚴(yán)重?zé)齻箅跫〖∥s和核凋亡的影響。
　　 方法：12

2、0只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分3組:(1)假傷組(n=40)(2)嚴(yán)重?zé)齻M（40％TBSA大鼠燙傷模型）(n=40)(3)嚴(yán)重?zé)齻?胰島素治療組（于傷后24小時(shí)開始皮下給予胰島素，每12小時(shí)一次，連續(xù)五天，劑量每日遞增，分別為0.25，0.5，0.75，1.0，1.25U/100g/次）(n=40)分別在傷后0、1、4、7、10天每組每次8只大鼠，取外周靜脈血測(cè)血糖、取腹主動(dòng)脈血和完整膈肌。嚴(yán)重?zé)齻?胰島素治療組取標(biāo)本時(shí)間為胰島素注射

3、后8分鐘。使用投射電鏡(TEM)觀察膈肌凋亡超微結(jié)構(gòu);使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清sFas、sFasL、sTRAIL及血清胰島素水平;使用Roche血糖儀檢測(cè)血糖水平;使用Western blot檢測(cè)膈肌Akt、磷酸化Akt、Bax、Bcl-2、caspase-8、caspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：①嚴(yán)重?zé)齻蟠笫篌w重明顯降低，膈肌重量也顯著下降，胰島素治療后可改善大鼠體重和膈肌重量的減輕；②透射電鏡(

4、TEM)觀察到膈肌胞膜氣泡，胞質(zhì)濃縮，線粒體腫脹等典型凋亡現(xiàn)象，而對(duì)照組則未觀察到核凋亡現(xiàn)象；③嚴(yán)重?zé)齻M大鼠于傷后48小時(shí)出現(xiàn)應(yīng)激性高血糖，整體血糖在8mmol/L波動(dòng)，血清胰島素水平較假傷組顯著降低，胰島素治療組大鼠血糖在治療期間血糖波動(dòng)于5mmol/L，血清胰島素在治療期間較假傷組和燒傷組顯著增高；④燒傷組血清sFas/sFasL先迅速下降后緩慢上升，治療組血清sFas/sFasL先下降后迅速上升至正常水平，血清sTRAIL則是同

5、時(shí)間點(diǎn)胰島素治療組高于燒傷組高于假傷組；⑤Western Blot結(jié)果，燒傷組第1、4天p-Akt明顯下降，Bax/Bcl-2于第1、4、7天明顯上升，剪切體caspas-8在第1、4天表達(dá)明顯增加;治療組第1、4天p-Akt明顯上升，Bax/Bcl-2僅在第1天有所上升，caspas-8僅在第4天有所增加;胰島素治療組與燒傷組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，治療組剪切體caspas-3在傷后第1、4天顯著下降。
　　 結(jié)論：⑴嚴(yán)重?zé)齻笫篌w重

6、明顯下降，同時(shí)膈肌發(fā)生萎縮，血糖升高，產(chǎn)生胰島素抵抗，胰島素可減輕該膈肌萎縮，減輕胰島素抵抗（肌肉重量改變，血清胰島素和血糖變化）；⑵透射電鏡(TEM)下觀察到燒傷后膈肌肌細(xì)胞發(fā)生典型核凋亡現(xiàn)象，提示凋亡是膈肌萎縮的重要原因；⑶報(bào)道了死亡受體通路參與了燒傷后膈肌核凋亡:sTRAIL，caspas-8、caspas-3表達(dá)升高，sFas/sFasL下降，同時(shí)一些凋亡調(diào)節(jié)信號(hào)分子Bax/Bcl-2升高，胰島素信號(hào)通路受到抑制(p-Akt明顯