TRAIL和化療藥物協(xié)同誘導(dǎo)非小細胞肺癌凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:目前，抗腫瘤化療藥物的毒副作用，已成為其臨床應(yīng)用以及提高療效的主要障礙，尋找作用位點與現(xiàn)有化療藥物不同且特異性高、毒副作用小的抗腫瘤治療藥物成為腫瘤基礎(chǔ)和臨床研究的熱點。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)又稱凋亡素2-配體(Apo-2L)，是TNF家族的新成員，以其對腫瘤細胞殺傷的高度特異性，而對正常細胞無明顯毒性，而備受矚目。本研究旨在觀察TRAIL對人NSCLC細胞的體外生長抑制及誘導(dǎo)凋亡作用；以及與亞毒性劑量的DDP

2、聯(lián)合應(yīng)用是否具有協(xié)同抗腫瘤作用，并初步探討其作用機制。 方法:采用SRB染色法測定TRAIL、DDP單藥以及聯(lián)合應(yīng)用對NSCLC細胞NCI-H460和A549的生長抑制作用，并繪制生長抑制曲線，計算半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)；Hoechst33342染色熒光顯微鏡觀察TRAIL、DDP單藥及聯(lián)合作用后，細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；Annexin V-FITC/PI雙染色，流式細胞技術(shù)(FCM)檢測TRAIL、DDP單藥及聯(lián)用對細胞

3、凋亡率的影響；RT-PCR技術(shù)檢測藥物作用前后NCI-H460和A549細胞TRAIL膜受體DR4、DR5、DcR1、DcR2基因表達水平情況；Western blot分析藥物作用前后，NCI-H460細胞的Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白表達水平的改變。 結(jié)果: 1．SRB結(jié)果顯示TRAIL在體外對人大細胞肺癌NCI-H460及肺腺癌A549細胞有明顯的生長抑制作用，并具有明顯劑量依賴性，

4、NCI-H460對TRAIL的作用較為敏感，而A549細胞相對耐藥，IC<,50>值分別為6.119ng/ml和82.822μg/ml。DDP對NCI-H460、A549細胞均有明顯的細胞毒作用及劑量依賴性，IC<,50>值接近，分別為0.407μg/ml和0.519μg/ml。亞毒性劑量的DDP與TRAIL聯(lián)合應(yīng)用對NCI-H460及A549細胞具有協(xié)同抑制作用。 2．流式細胞術(shù)顯示，亞毒性劑量的DDP與TRAIL聯(lián)用能顯著增

5、加NCI-H460和A549的細胞凋亡。Hoechst33342熒光染色觀察到細胞皺縮、核碎裂、新月形核等典型的細胞凋亡特征性變化。 3．RT-PCR結(jié)果示，NCI-H460和A549細胞經(jīng)過TRAIL或/和DDP作用48h后，DR4和DR5的表達水平未發(fā)生明顯變化；NCI-H460細胞誘騙受體DcR2的表達略為下調(diào)；誘騙受體DcR1未能檢測出。 4．Western blot結(jié)果表明，亞毒性劑量的DDP和TRAIL協(xié)同作

6、用NCI-H460細胞48h后，Caspase-8和Caspase-9蛋白表達明顯增強；Bel-2的表達無明顯變化；Bax的表達略為增強。 結(jié)論: 1．TRAIL可通過誘導(dǎo)凋亡的方式有效的抑制人大細胞肺癌NCI-H460及肺腺癌A549細胞的增殖。 2．亞毒性劑量的DDP與TRAIL對NCI-H460和A549細胞有協(xié)同抗腫瘤的作用，并協(xié)同增強NCI-H460和．A549的細胞凋亡。 3．亞毒性劑量的DD