阿托伐他汀治療早期脫氫野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓犬模型及其機(jī)制.pdf

1、第一部分：脫氫野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓犬模型建立
　　背景：肺動脈高壓是以小肺動脈閉塞性重構(gòu)為特征、以肺動脈壓力升高為表現(xiàn)的疾病，目前治療措施不能達(dá)到治愈肺動脈高壓的目的，建立合適、可靠的肺動脈高壓動物模型顯得非常重要。
　　目的：脫氫野百合堿(dehydromonocrotaline，DHMC)誘導(dǎo)建立犬肺動脈高壓模型中，利用Swan-Ganz七腔漂浮導(dǎo)管和Vigilance系統(tǒng)根據(jù)連續(xù)熱稀釋法(continuousther

2、modilution cardiac output，CCO)測定心輸出量(cardiac output，CO)、肺血管阻力(pulmonary vascular resistance，PVR)、肺動脈平均壓力(pulmonary arterialmean pressLire，PAMP)，本研究目的旨在探討建立犬肺動脈高壓模型及測定肺動脈壓力和心輸出量的方法，為進(jìn)一步研究肺動脈高壓藥物治療機(jī)制及其干預(yù)措施奠定基礎(chǔ)。
　　方法：健康比

3、格犬10只，隨機(jī)分成兩組：實(shí)驗(yàn)組(2mg/kg DHMC，n=5)與溶劑對照組(1ml/kg二甲基酰胺，n=5)；用脫氫野百合堿右心房注射的方法建立肺動脈高壓的動物模型，藥物干預(yù)前和干預(yù)后8周應(yīng)用多普勒超聲心動圖測量血流加速時間(ACT)，右室射血前時間(RPEP)，Tei指數(shù)和三尖瓣環(huán)收縮期位移(TAPSE)。應(yīng)用Swan-Ganz漂浮導(dǎo)管和Vigilance系統(tǒng)測定PAMP、PVR及CO。
　　結(jié)果：
　　1、與對照組比

4、較，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后8周食欲減退、活動減少、反應(yīng)下降、皮毛無光澤和呼吸急促，體重增長緩慢。
　　2、術(shù)后8周，心超發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的Tei指數(shù)較對照組明顯增加，具有顯著性差異(P<0.05)。而ACT、TAPSE比較，實(shí)驗(yàn)組較對照組明顯減少，具有顯著性差異(P<0.05)。
　　3、實(shí)驗(yàn)組肺血管阻力由基礎(chǔ)的(241.63±74.54)dyn·sec·cm-5上升到(1447.33±74.11)dyn·sec·cm-5(P<0.01)，實(shí)

5、驗(yàn)組基礎(chǔ)CO為(4.64±0.50)L/min，而用藥后CO為(1.54±0.36)L/min(P=0.035)，具有顯著性差異。
　　4、病理學(xué)可觀察到實(shí)驗(yàn)組的肺小動脈增生明顯，肺動脈管壁明顯增厚，中膜平滑肌細(xì)胞增生，外彈力膜增厚。
　　結(jié)論：利用脫氫野百合堿右心注射可成功地建立能夠模擬人類肺動脈高壓的動物模型。首次經(jīng)漂浮導(dǎo)管和Vigilance系統(tǒng)根據(jù)連續(xù)熱稀釋法原理在犬肺動脈高壓模型中進(jìn)行PAMP、PVR和CO測定，該

6、方法具有準(zhǔn)確穩(wěn)定、可重復(fù)操作和對實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛣?chuàng)傷小的優(yōu)點(diǎn)。
　　第二部分阿托伐他汀對早期野百合堿致肺動脈高壓犬模型肺血管內(nèi)皮系統(tǒng)作用
　　背景：肺動脈高壓其發(fā)病機(jī)制不明，尚無有效治療方法。研究發(fā)現(xiàn)他汀類藥物應(yīng)用，可減緩PAH癥狀的進(jìn)展，而他汀類藥物如何影響PAH的發(fā)生發(fā)展，目前尚不十分清楚。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)研究探討阿托伐他汀早期干預(yù)由脫氫野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓的比格犬，觀察其對于肺血管內(nèi)皮系統(tǒng)的作用及其可能的機(jī)制。

7、>　　方法：分組：阿托伐他汀組n=7(2mg/kg野百合堿+2mg/kg阿托伐他汀)；野百合堿組n=5(2mg/kg野百合堿組+安慰劑)；正常對照組n=6(溶劑0.1ml/kg二甲基酰胺組)；藥物干預(yù)前和干預(yù)8周后應(yīng)用多普勒超聲心動圖測量.ACT、RPEP、Tei指數(shù)、TAPSE，使用漂浮導(dǎo)管測量血流動力學(xué)參數(shù)，用免疫組織化學(xué)染色法檢測肺小動脈天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth

8、museleactin，α-SMA)蛋白表達(dá)；用實(shí)時定量PCR(Realtime Quantification-PCR，RTQ-PCR)法檢測各組肺組織內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、內(nèi)皮素前體-1(preproET-1)表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、心超發(fā)現(xiàn)野百合堿組的RPEP、RPEP/ACT、Tei指數(shù)較阿托伐他汀組和正常對照組明顯增加，具有顯著性差異(P<0.05)。而ACT、TAPSE比較，野百合堿組較阿托伐他汀組和

9、正常組明顯減少，具有顯著性差異(P<0.05)。
　　2、阿托伐他汀組犬的肺動脈壓力、右心室收縮壓、肺動脈收縮壓和肺血管阻力較野百合堿組明顯下降(P<0.05)，而心輸出量明顯升高(P<0.05)，并接近正常對照組。
　　3、免疫組化顯示阿托伐他汀組的Caspase-3呈陽性，與野百合堿組比較灰度積分(35.22±8.38 vs8.19±4.91，P<0.05)；而野百合堿組α-SMA呈陽性表達(dá)，阿托伐他汀組肺動脈僅少量表達(dá)

10、，灰度積分比較(15.74±2.38 vs38.63±10.1，P<0.05)。
　　4、肺組織preproET-1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在阿托伐他汀組顯著低于野百合堿組(P<0.05)；eNOS mRNA轉(zhuǎn)錄水平在阿托伐他汀組顯著高于野百合堿組(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、早期使用阿托伐他汀藥物可以明顯降低野百合堿誘導(dǎo)產(chǎn)生的肺動脈壓力及右心負(fù)荷，而不影響體循環(huán)壓力。
　　2、早期使用阿托伐他汀藥物能上調(diào)e

11、NOS合成，抑制ET-1，改善肺血管功能。
　　3、早期使用阿托伐他汀藥物能抑制α-SMA表達(dá)，促進(jìn)Caspase-3凋亡基因表達(dá)，誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞凋亡，改善肺血管重建。
　　第三部分：阿托伐他汀早期抑制野百合堿致肺動脈高壓犬的炎癥反應(yīng)
　　背景：近年，炎癥和免疫機(jī)制在PH發(fā)病中的作用逐漸受到重視。阿托伐他汀干預(yù)肺動脈高壓是否通過炎癥機(jī)制未見報道。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)研究旨在觀察阿托伐他汀早期干預(yù)由脫氫野百合堿誘導(dǎo)肺

12、動脈高壓犬模型肺組織白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的變化，探討早期應(yīng)用阿托伐他汀對肺動脈高壓犬模型的肺血管重構(gòu)及抗炎作用機(jī)制。
　　方法：分組：阿托伐他汀組n=7(2mg/kg野百合堿+2mg/kg阿托伐他汀)；野百合堿組n=5(2mg/kg野百合堿組+安慰劑)；正常對照組n=6(溶劑0.1ml/kg二甲基酰胺組)；肺組織切片HE染色，應(yīng)用病理圖像分析系統(tǒng)測定并計算各組

13、肺小動脈壁面積/管面積比(W/V)和管壁厚/管外徑比(WT/D)；用RTO-PCR法檢測各組肺組織IL-1β、TNF-α及VEGF的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、病理組織切片觀察到野百合堿組W/V和WT/D顯著高于阿托伐他汀組(10.41±0.47％VS6.641±0.48％，31.67±0.39％VS16.97±0.62％)；肺小動脈周圍炎癥評分，野百合堿組顯著高于阿托伐他汀組(P<0.05)。
　　2、肺組織IL