百里醌在野百合堿誘導(dǎo)的肺動脈高壓中的治療作用及機(jī)制.pdf

1、肺動脈高壓(pulmonary arterial hypertension，PAH)的特點(diǎn)是肺血壓的升高和血管重塑，進(jìn)而導(dǎo)致右心室肥厚和患者死亡。氧化應(yīng)激與肺小動脈細(xì)胞的過度細(xì)胞增殖和凋亡抵抗導(dǎo)致的肺血管重構(gòu)是肺動脈高壓發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵。百里醌(thymoquinone，TQ)是從黑種草分離出的活性成分，已被證明對許多疾病有治療作用，尤其是癌癥。百里醌能通過各種凋亡機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。所以百里醌可能通過促進(jìn)肺小血管細(xì)胞的凋亡減少血管

2、重構(gòu)來治療肺動脈高壓。
　　目的：
　　研究百里醌對野百合堿誘導(dǎo)肺動脈高壓的治療作用及相關(guān)的作用機(jī)制。
　　方法：
　　適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，68只大鼠隨機(jī)分為三組:(1)對照組(n=8)接受生理鹽水（皮下注射）+橄欖油（腹腔注射），(2)MCT組(n=15)接受MCT(60mg/kg，皮下注射)+橄欖油（腹腔注射），TQ(3)MCT+TQ組(n=15)接受MCT(60mg/kg，皮下注射)+百里醌（8mg/kg/d

3、，腹腔注射），(4) MCT+TQ組(n=15)接受MCT（60mg/kg，皮下注射）+百里醌（12mg/kg/d，腹腔注射），(5) MCT+TQ組(n=15)接受MCT(60mg/kg，皮下注射)+百里醌（16 mg/kg/d，腹腔注射）。MCT注射2周后開始百里醌治療，每日一次并持續(xù)2周。每周測量體重，以調(diào)整劑量。4周后處死所有動物并稱量體重。大鼠用戊巴比妥鈉(60mg/kg，腹腔注射)麻醉。檢測右心室收縮壓，右心室與左心室加室間

4、隔重量比和右心室與體重重量比。用H&E染色和Masson染色評估肺小血管壁厚度(直徑50-100μm)和纖維化程度。檢測肺組織中MDA和SOD來評估氧化應(yīng)激。PCNA用免疫組化和western blot的方法檢測來評估增值，TUNEL用免疫組化的方法凋亡檢測評估凋亡。Bax，Bcl-2，MMP2，MMP9，PCNA，Cleaved caspase3，Cleaved PARP，MCM6; STAT3，p48MAPK，Rb和NF-κB的激活

5、通過Western blot檢測。同時(shí)用免疫組化染色檢測Bax、Bcl-2、PCNA和TUNEL的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.MCT導(dǎo)致RVSP明顯升高(p＜0.05)，并且百里醌(8mg/kg)不能降低RVSP.但是，百里醌(12mg/kg)能輕微降低RVSP(p＜0.05)并且百里醌(16mg/kg)能明顯降低RVSP(p＜0.01)。
　　2.MCT注射導(dǎo)致RV/(LV+S)(p＜0.01)和RV/BW(p＜0.

6、01)明顯升高。同樣地，百里醌(8mg/kg和12mg)不能降低RV/(LV+S)(p＞0.05)和RV/BW ratio(p＞0.05)。但是，百里醌(16mg/kg)治療也能明顯減少RV/(LV+S)(p＜0.01)和RV/BW(p＜0.01)。
　　3.野百合堿注射導(dǎo)致壁厚度和纖維化顯著增加。百里醌(16mg/kg)治療顯著抑制這些肺組織病理變化。
　　4.野百合堿引起肺組織MDA水平升高(p＜0.05)和SOD活性下

7、降(p＜0.05)。百里醌能降低MDA(p＜0.05)以及提到SOD活性(p＜0.05)。
　　5.野百合堿注射導(dǎo)致肺內(nèi)小動脈PCNA陽性細(xì)胞的增加和TUNEL陽性細(xì)胞的減少。然而，百里醌能逆轉(zhuǎn)的PCNA陽性細(xì)胞的增加和TUNEL陽性細(xì)胞的減少。
　　6.野百合堿導(dǎo)致了活化的Caspase3(p＜0.01)和PARP(p＜0.01)的明顯降低，百里醌再次升高了活化的Caspase3(p＜0.01)和PARP(p＜0.01)。

8、
　　7.野百合堿誘導(dǎo)Bax陽性細(xì)胞和表達(dá)的減少(p＜0.05)和的Bcl-2陽性細(xì)胞和表達(dá)的增加(p＜0.05)，百里醌升高了Bax陽性的細(xì)胞和表達(dá)(p＜0.05)，降低了Bcl-2陽性的細(xì)胞和表達(dá)(p＜0.05)。
　　8.與對照組相比，MMP2在野百合堿組中明顯升高(p＜0.01)，百里醌治療顯著降低MMP2的表達(dá)(p＜0.01)。
　　9.野百合堿誘導(dǎo)p38MAPK磷酸化顯著增強(qiáng)(p＜0.01)。然后激活的p3