薯蕷皂苷元干預(yù)野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓大鼠實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在觀(guān)察早期應(yīng)用薯蕷皂苷元(diosgenin，Dio)對(duì)野百合堿(monocrotaline，MCT)誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterialhypertension，PAH)的作用，并探討其機(jī)制。
　　方法:
　　選擇健康雄性的SD大鼠36只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control組n=12)、MCT模型組(MCT組n=12)、肺動(dòng)脈高壓薯蕷皂苷元干預(yù)組(S組n=12)，3組均用標(biāo)準(zhǔn)

2、飼料在同等條件下喂養(yǎng)。Control組:腹腔內(nèi)一次性注射對(duì)照溶劑（5％乙醇+生理鹽水2∶8），于造模后第1-28天給予0.5ml溶媒（5％乙醇+蒸餾水）。MCT組:腹腔內(nèi)一次性注射1％ MCT溶液(60mg/kg)（用乙醇和生理鹽水按照體積比2∶8配制）造模，于造模后第1-28天給予0.5ml溶媒。S組:腹腔內(nèi)一次性注射1％ MCT溶液(60mg/kg)造模，于造模后第1-28天給予Dio80mg/kg（溶于0.5ml溶媒）。右心導(dǎo)管法

3、測(cè)定肺動(dòng)脈平均壓(meanpulmonary artery pressuremPAP)，將心臟取下，分離右心室(rightventricular RV)和左心室+室間隔（left ventricular+septum LV+S），用紙吸干水分，用天平稱(chēng)量重量，計(jì)算右心肥厚指數(shù)(RV/(LV+S)比值），以判斷右心室肥厚程度。HE染色觀(guān)察肺動(dòng)脈重構(gòu)，測(cè)其內(nèi)、外徑，計(jì)算血管壁厚度系數(shù)D=（血管外徑-管腔內(nèi)徑）×0.5/血管外徑，用來(lái)評(píng)估肺小

4、動(dòng)脈壁增厚程度。Masson染色觀(guān)察肺動(dòng)脈重構(gòu)及纖維化程度，對(duì)膠原纖維面積(CA)、血管橫截面積(CVA)及二者比值CA/CVA進(jìn)行測(cè)定。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbentassay, ELISA)檢測(cè)肺組織勻漿中IL-6水平。原位末端標(biāo)記法(Terminal-deoxynucleoitidyl Transferase Mediated Nick End Labeling,TUNEL法)檢測(cè)大鼠肺動(dòng)

5、脈平滑肌細(xì)胞凋亡情況并計(jì)算TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞百分比[凋亡指數(shù)(apoptotic index AI)]，最后各組數(shù)據(jù)通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行組間分析比較。
　　結(jié)果:
　　1.與Control組相比，MCT組大鼠平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)、RV/(LV+S)、血管壁厚度系數(shù)(D)和膠原纖維面積(CA)/血管橫截面積(CVA)比值明顯增高(P＜0.05)，說(shuō)明造模成功。與MCT相比，薯蕷皂苷元mPAP、RV/(LV+S)、D和CA/C

6、VA明顯降低(P＜0.05)。
　　2.HE染色觀(guān)察Control組肺組織光鏡下，肺動(dòng)脈結(jié)構(gòu)清楚，厚度較薄，而且一致，少有炎癥物質(zhì)浸潤(rùn)。MCT組肺動(dòng)脈結(jié)構(gòu)不清楚，管壁明顯增厚，管腔狹窄，血管大量炎癥因子浸潤(rùn)。S組與MCT組相比，肺動(dòng)脈管壁厚度明顯降低，管腔狹窄明顯降低，炎癥因子浸潤(rùn)明顯降低。
　　3.Masson染色觀(guān)察Control組:大鼠肺小動(dòng)脈內(nèi)膜平整光滑，膠原含量甚微，內(nèi)膜、中膜少量藍(lán)色膠原纖維。MCT組:大鼠肺小動(dòng)

7、脈內(nèi)膜紊亂，內(nèi)膜、中膜大量藍(lán)色膠原纖維，增厚明顯，與MCT組相比S組:大鼠肺小動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜藍(lán)色膠原纖維明顯降低。
　　4.ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肺組織勻漿中IL-6水平MCT組較Control組顯著升高(P＜0.05)，S組肺組織勻漿中IL-6水平比MCT組顯著降低（P＜0.05）。
　　5.TUNEL法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Control組可見(jiàn)細(xì)胞核較多棕黃色染色為陽(yáng)性平滑肌細(xì)胞，MCT組可見(jiàn)少量陽(yáng)性平滑肌細(xì)胞，S組陽(yáng)性可見(jiàn)較多陽(yáng)性平滑肌

8、細(xì)胞，與Control組相比，MCT組AI明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與MCT組相比，S組AI也明顯升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.Dio抑制MCT誘導(dǎo)的大鼠mPAP、RV/(LV+S)、D和CA/CVA的升高，提示Dio對(duì)MCT誘導(dǎo)的大鼠PAH模型具有預(yù)防作用。
　　2.Dio可抑制MCT誘導(dǎo)的大鼠肺組織中炎癥因子的表達(dá)，在其預(yù)防PAH作用的機(jī)制可能與抑制炎癥反應(yīng)相關(guān)。
　　3.Dio可促進(jìn)MCT誘