神經(jīng)移位術(shù)重建高位頸脊髓損傷大鼠膈肌功能及神經(jīng)通路重塑的研究.pdf

1、目的：脊髓膈神經(jīng)元胞體所在核團(tuán)主要位于頸3-頸5水平，高位頸脊髓損傷病人，若損傷累及頸3-頸5水平，隨之則出現(xiàn)完全性或不完全性的膈肌癱瘓。受損的呼吸系統(tǒng)相關(guān)肌肉嚴(yán)重限制了患者的活動、生活質(zhì)量及發(fā)聲，因而在慢性進(jìn)展階段不得不采用機(jī)械通氣以輔助患者呼吸。然而伴隨機(jī)械通氣所帶來的并發(fā)癥逐漸增加，如呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎、張力性氣胸及縱膈氣腫等等。長期機(jī)械通氣引起的呼吸道相關(guān)并發(fā)癥是導(dǎo)致高位脊髓損傷患者高死亡率高主要原因。本課題組發(fā)現(xiàn)可以將大鼠副神經(jīng)

2、作為動力神經(jīng)，移位吻合至膈神經(jīng)以重建高位頸髓橫斷傷后膈肌運(yùn)動功能。本課題擬在其基礎(chǔ)上建立單側(cè)頸3脊髓半切動物模型，進(jìn)一步探討神經(jīng)移位術(shù)后大鼠膈肌功能恢復(fù)的程度，并通過神經(jīng)逆行示蹤的方法，研究呼吸相關(guān)神經(jīng)通路重塑的的情況。
　　方法：健康成年雄性S-D大鼠（100-150克）48只，平均隨機(jī)分配到A、B、C三組，每組16只。A組為健康大鼠組，B組為左側(cè)膈神經(jīng)、副神經(jīng)在鎖骨水平離斷組，C組為左側(cè)副神經(jīng)斜方肌支鎖骨水平移位吻合膈神經(jīng)干組

3、。飼養(yǎng)6個月后，每組隨機(jī)選取8只大鼠行胸片、肺功能、動脈血?dú)夥治?，之后將這部分大鼠處死。剩余每組8只大鼠行頸3脊髓左側(cè)半切損傷，飼養(yǎng)1周后，再次將每組剩余8只大鼠，行胸片、肺功能、動脈血?dú)夥治?。再次選取健康成年雄性S-D大鼠（100-150克）24只，隨機(jī)平均分配至D、E、F三組，每組8只。其中D、E組為健康大鼠組， F組為神經(jīng)移位組，正常飼養(yǎng)6月后，E、F組大鼠行頸3脊髓左側(cè)半切。左側(cè)膈肌行綠色熒光蛋白基因重組的偽狂犬病毒定點(diǎn)注射，順

4、時針選取4點(diǎn)，每點(diǎn)注射5微升。正常飼養(yǎng)4天后行心臟灌注、取腦。連續(xù)冰凍切片后于熒光顯微鏡觀察，并同大鼠腦解剖圖譜進(jìn)行比對。選取帶有熒光的切片行免疫組織化學(xué)染色。使用NIS-Elements2.1軟件獲取圖像，使用Image-Pro Plus6.0行綠色熒光顯色陽性神經(jīng)元胞體計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS20.0軟件，采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較。組間兩兩比較采用Bonferroni法（方差齊時）或Mann-Whitney法（方差不齊時）

5、，P=0.05。
　　結(jié)果：頸3左側(cè)脊髓半切前，B、C兩組大鼠肺功能相關(guān)指標(biāo)均低于A組，但C組優(yōu)于B組。頸3左側(cè)脊髓半切后，A組大鼠各項(xiàng)肺功能指標(biāo)約下降50％，B、C兩組指標(biāo)同脊髓半切前基本持平，略有下降，此時C組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于A、B兩組。E組大鼠未觀察到熒光顯像的神經(jīng)元細(xì)胞，D、F組大鼠在延髓內(nèi)檢測到綠色熒光，免疫組織化學(xué)染色證實(shí)為綠色熒光蛋白基因重組偽狂犬病毒轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元細(xì)胞核團(tuán)。
　　結(jié)論：副神經(jīng)斜方肌支在鎖骨水平