副神經(jīng)移位膈神經(jīng)重建高位頸髓損傷大鼠呼吸功能的中樞機(jī)制的研究.pdf

1、目的：高位頸髓損傷患者，呼吸功能喪失，死亡率極高，為了降低此類患者的死亡率，重建其自主呼吸功能尤為重要。本課題組在國家自然基金的資助下，采用副神經(jīng)移位膈神經(jīng)的方法成功重建了高位頸髓損傷大鼠的呼吸功能，建立了動物模型。本研究旨在通過腺相關(guān)病毒、偽狂犬病毒逆行示蹤及免疫組織化學(xué)染色的方法進(jìn)一步揭示副神經(jīng)移位膈神經(jīng)重建高位頸髓損傷大鼠呼吸功能的中樞機(jī)制，為進(jìn)一步將該方法學(xué)運(yùn)用于臨床提供更為殷實(shí)的理論依據(jù)。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)以成年雄性SD

2、大鼠為實(shí)驗(yàn)動物。利用腺相關(guān)病毒AAV-Retro-GFP注射副神經(jīng)、膈神經(jīng)，進(jìn)行跨單突觸逆行追蹤支配正常SD大鼠副神經(jīng)和膈神經(jīng)的運(yùn)動神經(jīng)元。利用偽狂犬病毒PRV-CMV-EGFP注射副神經(jīng)、膈神經(jīng)，進(jìn)行跨多級突觸逆行追蹤支配正常SD大鼠副神經(jīng)和膈神經(jīng)的前運(yùn)動神經(jīng)元及其相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)。利用免疫組織化學(xué)染色的方法，對病毒標(biāo)記核團(tuán)進(jìn)行特異性雙標(biāo)，進(jìn)一步確證病毒標(biāo)記的神經(jīng)核團(tuán)。相同方法，利用腺相關(guān)病毒AAV-Retro-GFP、偽狂犬病毒PRV-

3、CMV-EGFP注射吻合神經(jīng)吻合處遠(yuǎn)端，進(jìn)行逆行追蹤副神經(jīng)移位膈神經(jīng)6個月后支配SD大鼠膈肌運(yùn)動的運(yùn)動神經(jīng)元、前運(yùn)動神經(jīng)元及其相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)。并利用特異性抗體對病毒標(biāo)記核團(tuán)進(jìn)行雙標(biāo)，進(jìn)一步確證病毒標(biāo)記神經(jīng)核團(tuán)。最后，通過對比支配正常SD大鼠的膈神經(jīng)、副神經(jīng)及神經(jīng)移位后SD大鼠的吻合神經(jīng)的運(yùn)動神經(jīng)元、前運(yùn)動神經(jīng)元及其相關(guān)神經(jīng)核團(tuán)的變化，初步揭示神經(jīng)移位重建高位頸髓損傷SD大鼠呼吸功能的中樞機(jī)制變化。
　　結(jié)果：(1)正常SD大鼠:支配

4、副神經(jīng)斜方肌支的運(yùn)動神經(jīng)元主要集中在延髓網(wǎng)狀核。支配副神經(jīng)的前運(yùn)動神經(jīng)元主要集中在孤束核、延髓中縫、面神經(jīng)核。支配膈神經(jīng)的運(yùn)動神經(jīng)元主要集中在頸髓C4-C6的脊髓前角。支配膈神經(jīng)的前運(yùn)動神經(jīng)元主要集中在腹側(cè)呼吸群、延髓孤束核、延髓中縫、上橄欖核。(2)神經(jīng)移位后SD大鼠:支配吻合神經(jīng)的運(yùn)動神經(jīng)元主要集中在延髓網(wǎng)狀核。支配吻合神經(jīng)的前運(yùn)動神經(jīng)元主要集中在孤束核、延髓中縫、面神經(jīng)核。
　　結(jié)論：神經(jīng)移位6個月后，SD大鼠的副神經(jīng)核和（