TTP對小鼠乳腺癌細胞系4T1調控的研究.pdf

1、目的:乳腺癌作為一種惡性腫瘤已躍居全球女性發(fā)病率排行之榜首，嚴重危害女性的身心健康和生命。常規(guī)的手術、放化療及抗癌藥物的治“表”手段并不能很好的解決復發(fā)和遠處轉移的難題，這就使得基因治療作為一種新興的技術倍受關注，將之運用于乳腺癌的研究中，成績也日漸突顯。TTP(trisetetraprolin)是鋅指蛋白的一種，具有依賴鋅離子存在的自我高度螺旋成手指狀的立體結構域。從TTP基因敲除小鼠的動物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，TTP是與免疫反應、炎癥和

2、造血相關聯(lián)的[1]。有研究顯示，TTP在一些腫瘤中的表達是降低的[2]，本實驗擬探討TTP基因過表達對乳腺癌的影響。
　　 方法:
　　 1.選擇構建好的質粒PCR3.1和質粒PCR3.1+mTTP穩(wěn)定轉染乳腺癌腺癌4T1細胞系，通過鏡下觀察和細胞遷移實驗來檢測轉染后細胞系的生物學性狀，并用實時定量PCR的方法檢測TTP的表達情況
　　 2.將4T1細胞、穩(wěn)定轉染PCR3.1的4T1細胞和穩(wěn)定轉染PCR3.1+m

3、TTP的4T1細胞用流式細胞技術檢測細胞凋亡情況、免疫印跡法檢測mTTP蛋白表達、MTT法檢測細胞增殖情況。
　　 3.建立荷瘤小鼠動物模型，觀察腫瘤大小變化和肺轉移灶、用實時定量PCR檢測mCXCR4和mCXCR7的表達、流式細胞技術檢測外周血PBMC中Th17和Th1亞群。
　　 結果:
　　 1.用質粒PCR3.1和PCR3.1+mTTP穩(wěn)定轉染4T1細胞系，實時定量PCR檢測mTTP的表達情況，4T1細胞

4、轉染PCR3.1+mTTP之后，mTTP的表達明顯增高，細胞形態(tài)并未發(fā)生改變，可以進行后續(xù)細胞生物學方面的研究。
　　 2.流式細胞技術檢測4T1，4T1(PCR3.1)和4T1(PCR3.1+mTTP)三種細胞的凋亡狀況，結果表明三種細胞系凋亡無顯著性差異，加入促凋亡藥Staurosporine培養(yǎng)6小時后再次檢測細胞凋亡，測得4T1(PCR3.1+mTTP)細胞凋亡增加，凋亡率為29.5％，而4T1，4T1(PCR3.1)細

5、胞的凋亡率為17％和18％。
　　 3.在4T1，4T1(PCR3.1)和4T1(PCR3.1+mTTP)三組細胞進行了細胞劃痕試驗，三種細胞系的細胞遷移能力并無明顯差異。使用MTT法檢測三種細胞增殖的能力，結果發(fā)現(xiàn)轉染mTTP的細胞可以降低乳腺癌細胞的增殖能力。
　　 4.在荷瘤小鼠動物模型中，發(fā)現(xiàn)轉染mTTP的乳腺癌細胞接種小鼠后腫瘤的大小和未轉染mTTP的細胞相比，明顯減小，并且肺轉移灶減少，說明mTTP可以影響小

6、鼠乳腺癌的大小和轉移。
　　 5.用實時定量PCR檢測4T1腫瘤組織與正常乳腺組織中的mCXCR4&mCXCR7的表達情況，發(fā)現(xiàn)在腫瘤組織中mCXCR4&mCXCR7的表達明顯增高。mTTP轉染的4T1細胞使得mCXCR4的表達升高而mCXCR7的表達降低。
　　 6.流式細胞技術檢測外周血PBMC的Th1和Th17亞群。接種4T1(PCR3.1+mTTP)細胞后的外周血Th17數(shù)量增加，Th1則無明顯變化。