葡萄糖和胰島素對小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞分泌免疫抑制物質(zhì)的影響.pdf

1、目的：糖尿病和惡性腫瘤己成為當(dāng)前嚴(yán)重危害人類健康和生命的重大疾病。近年來，糖尿病與惡性腫瘤的關(guān)系己受到人們的重視。國外流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者發(fā)生乳腺癌的風(fēng)險明顯高于非糖尿病患者。有學(xué)者提出2型糖尿病是乳腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的獨立預(yù)后危險因素。糖尿病與乳腺癌的關(guān)系已經(jīng)成為備受關(guān)注的熱點。
　　 腫瘤免疫學(xué)研究表明，腫瘤細(xì)胞可以通過分泌免疫抑制物質(zhì)，降低機體免疫功能、逃避免疫監(jiān)視，此種免疫逃逸是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。TGF

2、-β1、VEGF和IL-6是重要的免疫抑制物質(zhì)，在糖尿病患者血清中含量明顯增高，并且與患者血中葡萄糖和胰島素的濃度關(guān)系密切。本研究選用小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞作為研究對象，用不同濃度的葡萄糖和胰島素對之作用，測定4T1細(xì)胞TGF-β1、VEGF和IL-6的分泌及其mRNA表達水平，為闡明糖尿病患者為何易患乳腺癌提供實驗和理論依據(jù)。
　　 方法：將4T1細(xì)胞分為15組。A組（對照組），RPMI1640培養(yǎng)液；B組，RPMI1640培養(yǎng)

3、液+5mmol/L葡萄糖；C組，RPMI1640培養(yǎng)液十10mmol/L葡萄糖；D組，RPMI1640培養(yǎng)液+25mmol/L葡萄糖；E組，RPMI1640培養(yǎng)液+35mmol/L葡萄糖；F組，RPMI1640培養(yǎng)液+5μIU/mL胰島素；G組，RPMI1640培養(yǎng)液+25μIU/mL胰島素；H組，RPMI1640培養(yǎng)液+125μIU/mL胰島素；I組，RPMI1640培養(yǎng)液+250μIU/mL胰島素；J組，RPMI1640培養(yǎng)液+1.

4、25μIU/mL胰島素；K組，RPMI1640培養(yǎng)液+5mmol/L葡萄糖+5μIU/mL胰島素；L組，RPMI1640培養(yǎng)液+5mmol/L葡萄糖+125μIU/mL胰島素；M組，RPMI1640培養(yǎng)液+25mmol/L葡萄糖+125μIU/mL胰島素；N組，RPMI1640培養(yǎng)液+25mmol/L葡萄糖+5μIU/mL胰島素；O組，RPMI1640培養(yǎng)液+25mmol/L葡萄糖+1.25μIU/mL胰島素。每組設(shè)雙復(fù)孔，培養(yǎng)48小時

5、。采用RT-PCR法檢測TGF-β1、VEGF和IL-6mRNA相對表達量，ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β1、VEGF和IL-6的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1 不同濃度的葡萄糖和胰島素對4T1細(xì)胞TGF-β1mRNA表達的影響
　　 D組、E組、M組、N組和O組TGF-β1mRNA的表達水平（分別為1.048±0.17、1.032士0.18、1.151士0.42、1.297士0.26和1.085士0.

6、14）與A組（0.597士0.16）相比明顯增高(P＜0.05)，其余各組與A組相比無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果顯示高濃度（25mmol/L、35mmol/L）的葡萄糖能夠上調(diào)4T1細(xì)胞TGF-β1mRNA的表達；胰島素濃度的變化不影響4T1細(xì)胞TGF-β1mR.NA的表達。
　　 2 不同濃度的葡萄糖和胰島素對4T1細(xì)胞VEGF mRNA表達的影響
　　 H組、I組、L組和M組VEGF mRNA的表達水平（分別為

7、0.946士0.11、0.965士0.18、0.924士0.11和0.956士0.12）與A組（0.577±0.08）比較均明顯增高(P＜0.05)。但其它組與A組相比無顯著性差異(P＞0.05)。提示高濃度（125μIU/mL和250μIU/mL）的胰島素能夠上調(diào)4T1細(xì)胞VEGF mRNA的表達；葡萄糖濃度的變化不影響4T1細(xì)胞VEGF mRNA的表達。
　　 3 不同濃度的葡萄糖和胰島素對4T1細(xì)胞IL-6 mRNA表達的

8、影響
　　 D組、E組、M組、N組和O組IL-6 mRNA的表達水平（分別為0.904士0.17、0.911±0.16、0.913士0.12、0.904±0.16和0.911士0.10）與A組（0.473±0.06）相比均有顯著性差異(P＜0.05)。其余各組與A組相比無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果顯示高濃度(25mmol/L、35mmol/L)的葡萄糖能夠上調(diào)4T1細(xì)胞IL-6 mRNA的表達；胰島素濃度的變化不影響4T1

9、細(xì)胞IL-6 mRNA的表達。
　　 4 不同濃度的葡萄糖和胰島素對4T1細(xì)胞分泌TGF-β1的影響
　　 D組、E組、M組、N組和O組細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β1的濃度（分別為75.015士5.03、74.65S士4.42、76.126±5.23、75.520士6.62和75.301±5.29）均明顯高于A組（53.841士3.86），差異有顯著性(P＜0.05)；而其他組與A組相比，均無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果

10、顯示高濃度(25mmol/L、35mmol/L)的葡萄糖能夠顯著增加4T1細(xì)胞TGF-β1的分泌；不同濃度的胰島素不影響4T1細(xì)胞TGF-β1的分泌。
　　 5 不同濃度的葡萄糖和胰島素對4T1細(xì)胞分泌VEGF的影響
　　 H組、I組、L組和M組細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF的濃度（分別為150.984土9.39、152.791士10.86、151.311士11.41和150.563±14.08）與A組（114.761±7.11

11、）相比均有顯著性差異(P＜0.05)。而其他組細(xì)胞培養(yǎng)上清中TGF-β1的濃度與A組相比無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果顯示不同濃度的葡萄糖對4T1細(xì)胞分泌VEGF無影響，高濃度（125μIU/mL和250μIU/mL）的胰島素能顯著增加4T1細(xì)胞VEGF的分泌。
　　 6 不同濃度的葡萄糖和胰島素對4T1細(xì)胞分泌IL-6的影響
　　 D組、E組、M組、N組和O組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6的濃度(分別為79.011土8.1

12、2、77.971士7.43、80.007士7.46、79.296士5.30和80.559±6.46)均明顯高于A組（56.993士7.91），差異有顯著性(P＜0.05)；而其他組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6的濃度與A組相比，均無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)果顯示高濃度(25mmol/L、35mmol/L)的葡萄糖能夠顯著增加4T1細(xì)胞IL-6的分泌；不同濃度的胰島素不影響4T1細(xì)胞IL-6的分泌。
　　 結(jié)論：
　　 1

13、高濃度的葡萄糖能夠上調(diào)4T1細(xì)胞TGF-β1和IL-6mRNA的表達，使4T1細(xì)胞培養(yǎng)液上清中TGF-β1和IL-6的分泌量增加。
　　 2 不同濃度的葡萄糖對4T1細(xì)胞VEGF mRNA的表達和分泌無影響。
　　 3 高濃度的胰島素能夠上調(diào)4T1細(xì)胞VEGF mRNA的表達，使4T1細(xì)胞培養(yǎng)液上清中VEGF的分泌量增加。
　　 4 不同濃度的胰島素對4T1細(xì)胞TGF-β1和IL-6 mRNA的表達無影響，對4T