點(diǎn)帶石斑魚病毒性神經(jīng)壞死病研究.pdf

1、病毒性神經(jīng)壞死病(Viral nervous necrosis disease，VNN disease)為近年來我國沿海石斑魚養(yǎng)殖廠上極為嚴(yán)重的疾病，其致病原為神經(jīng)壞死病毒(NervousNecrosis Virus)，此病毒感染易造成石斑魚及幼魚的大量死亡，死亡率往往高達(dá)90％，造成我國石斑魚養(yǎng)殖業(yè)極大的損失。該病毒為兩條單股RNA，分別為RNA1和RNA2，其中RNA1的功能為RNA-dependent RNA polymerase

2、(RdRp)，RNA2則可以轉(zhuǎn)錄翻譯出病毒的外殼蛋白。 本研究中，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RRT-PCR)等實(shí)驗(yàn)方法，對近年來福建南部地區(qū)海水養(yǎng)殖點(diǎn)帶石斑魚暴發(fā)性的傳染病進(jìn)行調(diào)查和研究。闡明了該地區(qū)養(yǎng)殖石斑魚傳染病的主要種類及其流行病學(xué)特征。病毒性神經(jīng)壞死病是該地區(qū)最常見、危害也最大的傳染病。該傳染病具有典型的神經(jīng)癥狀，游動(dòng)異常，中樞神經(jīng)和視網(wǎng)膜組織出現(xiàn)空泡壞死病變。病魚除了神經(jīng)異常外，無其它臨床癥狀，體表及體內(nèi)也

3、無明顯的病理變化或寄生蟲寄生。該病可通過魚卵垂直傳播，也可經(jīng)養(yǎng)殖水體水平傳播。來自受感染親魚的垂直傳播是魚苗感染的主要途徑。各種石斑魚以及生長階段的石斑魚均易感，但對幼體的危害更嚴(yán)重。 本試驗(yàn)建立了逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測點(diǎn)帶石斑魚神經(jīng)壞死病毒(NNV)的檢測方法，并應(yīng)用到傳染病調(diào)查和廈門1:2岸進(jìn)出境魚類病害檢疫中。同時(shí)，用組織切片法對石斑魚腦部和視網(wǎng)膜的特征性病變進(jìn)行觀察驗(yàn)證，也說明該檢測方法具有良好的特異性

4、和敏感性，能夠檢測到Pg級的核酸量。證明該方法是一種快速、簡便、準(zhǔn)確的檢測方法。應(yīng)用該方法對廈門地區(qū)海域十幾種海洋魚類進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)了有些蘭子魚，黃鰭鯛呈陽性。說明廈門海區(qū)神經(jīng)壞死病毒主要感染石斑魚類及少量其它魚類。 采用TaqMan探針技術(shù)，并且將假病毒技術(shù)構(gòu)建的含有神經(jīng)壞死病毒RNA2基因組的MS2噬菌體假病毒作為陽性質(zhì)控品，建立了TaqMan探針檢測點(diǎn)帶石斑魚神經(jīng)壞死病毒的熒光定量PCR方法，對影響PCR反應(yīng)的Mg<'2+

5、>濃度和退火溫度等條件進(jìn)行了優(yōu)化，并建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線，能夠在檢測中病毒檢測中進(jìn)行絕對定量，最低能檢測10個(gè)病毒，在實(shí)際檢測運(yùn)用中取得很好的效果。 本文還首次測定了點(diǎn)帶石斑魚神經(jīng)壞死病毒(MCNNV)RNA1和RNA2基因組的全序列。RNA1由3103個(gè)核苷酸組成，含有一個(gè)編碼982個(gè)氧基酸的開放閱讀框，分子量為110.40 kD．；RNA2由1433個(gè)核苷酸組成，含有一個(gè)編碼338個(gè)氨基酸的開放閱讀框，分子量為37.06 kD。對