斜帶石斑魚腫瘤壞死因子α基因的克隆及表達分析.pdf

1、腫瘤壞死因子（TNFα）是一種多效應的前炎癥細胞因子，由巨噬細胞、單核細胞、多形核白細胞、肥大細胞及光滑肌細胞等多種細胞產(chǎn)生，在不影響正常細胞的前提下，于體內(nèi)外均能殺傷腫瘤細胞并抑制腫瘤細胞的增殖；參與和調(diào)控機體的免疫應答，上調(diào)其他炎癥細胞因子的表達，增強包括吞噬、化學趨化、反應性氮氧物質(zhì)的產(chǎn)生等一系列細胞學反應。 本文利用同源克隆和RACE方法從健康斜帶石斑魚頭腎組織中克隆得到了斜帶石斑魚TNFα全長cDNA序列和基因序列。斜

2、帶石斑魚TNFα的cDNA序列全長為1377bp，含有一個762bp的開放閱讀框，編碼253個氨基酸的蛋白。經(jīng)生物信息學分析，斜帶石斑魚TNFα是一種跨膜蛋白，具有潛在的蛋白酶切位點及對其三級結(jié)構(gòu)形成必需的2個半胱氨酸，也具有TNF家族的標簽序列及5個炎癥細胞因子不穩(wěn)定基序ATTTA；進化樹構(gòu)建結(jié)果表明：斜帶石斑魚TNFα與其他魚類TNFα占據(jù)進化上獨立的分枝，且與已報道的鱸形總目魚類TNFα具有最近的親緣關(guān)系：空間結(jié)構(gòu)模擬顯示：斜帶石

3、斑魚TNFα與哺乳類TNFα的空間結(jié)構(gòu)相似，內(nèi)層與外層均由5個β折疊片結(jié)構(gòu)構(gòu)成。斜帶石斑魚TNFα基因長度為1801bp，由四個外顯子和三個內(nèi)含子組成，與其他魚類具有相似的結(jié)構(gòu)特征。 利用RealtimePCR技術(shù)，分析了TNFα在健康斜帶石斑魚各組織中的表達情況以及分裂素LPS、PolyI：C對斜帶石斑魚頭腎淋巴細胞TNFα基因表達的影響。定量結(jié)果顯示，TNFα在健康斜帶石斑魚各組織中呈組成型表達，在頭腎、脾、腎臟、鰓與下丘腦

4、等組織中均有較高表達，在腸道與肌肉組織中的表達量最低；研究還發(fā)現(xiàn)TNFα在垂體與下丘腦中以較高水平表達，尤以下丘腦最高，提示TNFα在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中起著重要作用。分裂素LPS與PolyI：C刺激斜帶石斑魚頭腎淋巴細胞均能顯著誘導TNFα基因的表達，但二者的作用效果并不相同。經(jīng)LPS刺激后的淋巴細胞TNFα基因表達量在16h達到了最大，而PolyI：C刺激后的淋巴細胞TNFα基因表達量在檢測的24h內(nèi)一直在增大。 為了進一步研究