直腸肛門畸形遠(yuǎn)端神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分布及GDNF、GFRα1、RET表達(dá)情況研究.pdf

1、目的:
　　 了解不同類型的直腸肛門畸形（anorectal malformations，ARM）患兒直腸閉鎖遠(yuǎn)端腸壁神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分布情況以及膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1(GFRα1)、酪氨酸激酶受體(RET)的表達(dá)情況，并探討其臨床意義。
　　 方法:
　　 1.選取天津市兒

2、童醫(yī)院2009年1月至2012年12月間臨床診斷為“直腸肛門畸形”病人12例:男8例，女4例;年齡3日至2歲;高位畸形6例，中位畸形2例，低位畸形4例。取直腸盲端及距離盲端3cm處腸壁組織標(biāo)本，新鮮標(biāo)本提取RNA逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)情況;石蠟包埋組織切片檢測神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分布情況，免疫組化技術(shù)檢測神經(jīng)營養(yǎng)因子在腸壁內(nèi)的表達(dá)情況。
　　 2.HE染色觀察神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分布情況。
　　 3.免疫組化SP法檢測

3、GDNF、GFRα1、RET蛋白在低、中、高位ARM直腸盲端及距直腸盲端3cm處腸壁組織中的表達(dá)情況。
　　 4.RT-PCR方法半定量分析GDNFmRNA、GFRα1 mRNA和RETmRNA在低、中、高位ARM距直腸盲端3cm處腸壁組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.手術(shù)后肛門功能隨訪結(jié)果:
　　 術(shù)后隨訪時(shí)間為3個(gè)月～4年。高位ARM中2例出現(xiàn)污便，1例出現(xiàn)稀便不能控制，無肛門失禁情況。中、

4、低位ARM中有1例出現(xiàn)直腸黏膜脫出，經(jīng)坐浴肛門護(hù)理好轉(zhuǎn);1例出現(xiàn)排氣時(shí)偶有污便，其余7例術(shù)后排便功能未見異常。按照中國醫(yī)科大學(xué)修定的肛門功能臨床評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)6分法，評(píng)估結(jié)果如下:高位ARM組優(yōu):50％(3/6)，良:50％(3/6);中低位ARM組優(yōu):83％(5/6)，良:17％(1/6)。
　　 2.HE染色結(jié)果:
　　 (1)直腸盲端:高位、中位和低位ARM，均未見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存在。
　　 (2)距離直腸盲端3cm

5、處取材的組織中:低位和中位ARM標(biāo)本中可見正常的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，而高位ARM標(biāo)本中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量明顯少，且細(xì)胞形態(tài)小，肌間神經(jīng)叢分布稀疏，且細(xì)。
　　 3.免疫組化染色結(jié)果:
　　 直腸盲端組織中三組標(biāo)本均未見神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá);距離直腸盲端3cm處組織中，觀察都有GDNF、GFRα1、RET蛋白的表達(dá)，但是表達(dá)的量有所不同，中低位ARM標(biāo)本中GDNF、GFRα1、RET的表達(dá)明顯高于高位ARM的表達(dá)情況。
　　 4.

6、RT-PCR方法半定量檢測結(jié)果:
　　 距離直腸盲端3cm處腸壁組織中存在GDNFmRNA、GFRα1mRNA和RETmRNA表達(dá);結(jié)果均顯示低位ARM表達(dá)最高，中位ARM表達(dá)次之，高位ARM表達(dá)最低。
　　 結(jié)論:
　　 1.ARM患兒直腸盲端無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存在，距盲端3cm處腸壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)（包括神經(jīng)叢、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞）存在發(fā)育異常。
　　 2.ARM患兒直腸末端（距盲端3cm處）腸壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育程度與直腸