EIAV-,FDDV-疫苗株免疫馬后部分體液免疫指標(biāo)的監(jiān)測與表達(dá)EIAV受體和熒光素酶報(bào)告基因的293細(xì)胞系的建立.pdf

1、為了闡明馬傳貧驢胎皮膚細(xì)胞弱毒疫苗株(FDDV<,11>-EIAV)體液免疫在免疫保護(hù)中的作用，為其它慢病毒疫苗的設(shè)計(jì)提供借鑒，將5匹EIAV陰性健康馬分為2組，第1組(6＃、7＃、8＃、 9＃馬)接1ml×10<-5'>TCID<,50>馬傳貧驢胎皮膚細(xì)胞弱毒疫苗株(EIAVFDDV<,11>)，第2組(5＃馬)接種1ml沒有接毒的驢胎皮膚細(xì)胞培養(yǎng)上清作為非免疫對照組。 免疫接種后210的天內(nèi)，定期采集血清，利用ELISA方法

2、對不同試驗(yàn)馬免疫后血清中針對EIAV結(jié)構(gòu)蛋白p26以及囊膜蛋白的抗體進(jìn)行了檢測，通過監(jiān)測p26以及囊膜蛋白特異性抗體滴度、p26蛋白特異性抗體的親和力變化、囊膜蛋白特異性抗體親和力和抗體構(gòu)象變化，發(fā)現(xiàn)該疫苗株免疫馬后第3周出現(xiàn)針對p26以及囊膜蛋白的特異性抗體，其抗體滴度的個(gè)體差異性較大，但都維持在較低水平；p26以及囊膜蛋白的特異性抗體親和力雖有波動，但親和力水平較高；囊膜蛋白特異性抗體的構(gòu)象指數(shù)都在2.0附近波動，表示囊膜蛋白特異性

3、抗體主要為構(gòu)象性抗體。免疫100天后囊膜蛋白的特異性抗體水平?jīng)]有大的變化，p26抗體水平非常低，但其抗體親和力水平卻較高。免疫210天后，所有馬均用1ml×10<'-5>血清稀釋度EIAV強(qiáng)毒遼寧株(EIAV L-21)進(jìn)行攻擊。攻毒前后對每匹馬進(jìn)行體溫監(jiān)測，攻毒后，對照馬(5＃馬)在第10天出現(xiàn)發(fā)熱，第16天死亡，其它所有免疫馬未見體溫升高和其它臨床癥狀，說明FDDVll毒株能夠產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)作用。研究表明馬傳貧驢胎皮膚細(xì)胞弱毒疫

4、苗株產(chǎn)生的體液免疫與馬傳貧致病株感染馬后產(chǎn)生的免疫保護(hù)中的體液免疫截然不同，暗示體液免疫在EIAV感染馬免疫保護(hù)中的作用可能需要進(jìn)一步評價(jià)，同時(shí)也為其它慢病毒疫苗的設(shè)計(jì)提供參考。 此外，為了在體外精確、簡便地測定馬傳染性貧血病毒(EIAV)的中和抗體和研究不同毒株與受體親和性的差異，以真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1+為載體，插入馬慢病毒受體1(ELR1)基因、EIAV驢白細(xì)胞疫苗株DLA-122前病毒長末端重復(fù)序列(LTR)及其下

5、游的螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase)基因構(gòu)建pELR1-LTR-Luc質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，建立了ELR1-LTR(293-E)細(xì)胞系。該細(xì)胞系能穩(wěn)定表達(dá)ELR1基因，并且能在LTR的控制下有條件地促進(jìn)螢火蟲熒光素酶基因的表達(dá)。當(dāng)EIAV和ELR1結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞增殖時(shí)，表達(dá)病毒編碼的反式激活蛋白(Tat)能反式激活LTR，使螢火蟲熒光素酶基因的表達(dá)明顯增加。用1000TCID<,50>的EIAV驢胎皮膚細(xì)胞適應(yīng)毒株D