華蟾素注射液治療肝癌的療效、有效成份及作用機(jī)制研究.pdf

1、華蟾素注射液在我科運(yùn)用已有多年的歷史,我們應(yīng)用華蟾素注射液,綜合治療中晚期原發(fā)性肝癌,獲得了一定的臨床療效.另外,臨床實(shí)踐還證實(shí),華蟾素具有一定的抗肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的效果.但華蟾素注射液的有效成份及其含量的始終未能明確,我們?cè)趨⒖紘鴥?nèi)外對(duì)蟾蜍抗腫瘤研究報(bào)導(dǎo)的基礎(chǔ)上,進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)研究,初步證明了華蟾素注射液治療肝癌的有效成份及其可能的作用機(jī)制.1.檢測(cè)了華蟾素注射液中蟾毒靈、華蟾酥毒基、酯蟾毒配基三種成份的含量.蟾毒靈是國內(nèi)外研究最多

2、,認(rèn)為是蟾蜍中抗腫瘤活性最強(qiáng)的成份之一,華蟾酥毒基和酯蟾毒配基是中國藥典中規(guī)定的蟾酥的質(zhì)控成份,檢測(cè)結(jié)果表明華蟾素注射液中蟾毒靈、華蟾酥毒基、酯蟾毒配基濃度分別是0.333μg/ml、0.159μg/ml、0.110μg/ml.2.觀察了三種蟾毒單體對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用,通過MTT藥敏實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)蟾毒靈,華蟾酥毒基對(duì)人肝癌細(xì)胞具有極強(qiáng)的生長抑制作用,對(duì)肝癌細(xì)胞生長抑制作用均高于絲裂霉素.兩單體對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷作用局限在一定較窄的范圍內(nèi),即

3、蟾毒靈在10<'-7>mol/L~10<'-8>mol/L華蟾酥毒基在10<'-6>mol/L~10<'-7>mol/L之間,高于此濃度時(shí),在作用96小時(shí)后,細(xì)胞幾乎完全被殺傷,而低于此濃度時(shí),對(duì)腫瘤細(xì)胞幾乎無殺傷作用.3.通過錐蟲藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期檢測(cè)等方法觀察了三種蟾毒單體對(duì)人肝癌細(xì)胞形態(tài)、膜完整懷、細(xì)胞DNA含量和血管內(nèi)皮生長因子分泌量等指標(biāo)的影響.4.初步探索了蟾毒靈抗肝癌作用的部分作用機(jī)制,通過免疫組化方法,觀察10<'-6

4、>mol/L蟾毒靈作用6小時(shí),對(duì)正常肝細(xì)胞系L-02和人肝癌PLC/PRE/5細(xì)胞系BCL-2,BAX,COX-1,COX-2蛋白表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)蟾毒靈可抑制肝癌細(xì)胞BCL-2蛋白表達(dá),升高BAX蛋白表達(dá),顯著降低BCS-2/BAX比例,對(duì)COX-1蛋白的影響不明顯,但可明顯抑COX-2蛋白的表達(dá).從基因蛋白表達(dá)的角度部分解釋蟾毒靈抑制腫瘤細(xì)胞生長,抑制血管生成和逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞化療耐藥的作用機(jī)制.5.探索提高華蟾素注射液抗癌效果的方法,通

5、過體外MTT藥敏實(shí)驗(yàn)觀察華蟾素臨床用藥濃度、10倍和100倍臨床用藥濃度對(duì)肝癌細(xì)胞的生長抑制作用.華蟾素注射液對(duì)人肝癌細(xì)胞具有一定的生長抑制作用,這種生長抑制作用隨藥物濃度的增高和作用時(shí)間的延長而增加.在華蟾素中加入10<'-8>mol/L蟾毒靈,對(duì)肝癌的生長抑制作用可由30％提高到51％,使肝癌細(xì)胞凋亡比例明顯增高,顯著提高華蟾素注射液對(duì)肝癌細(xì)胞的生長抑制和誘導(dǎo)凋亡作用.以上研究,不僅初步確定了華蟾素注射液的有效成份及有效劑量,而且部