柑橘轉(zhuǎn)chit42和phyB基因的研究.pdf

1、柑橘是世界第一大水果，長期以來，常規(guī)育種手段受到珠心胚干擾、性器官敗育、育種周期長以及遺傳上高度雜合等因素的影響，進(jìn)程緩慢。近年來，不斷完善的轉(zhuǎn)基因技術(shù)為我們提供了一條快速直接品種改良的途徑。本研究以枳的實生苗上胚軸為外植體，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化phyB基因。成年態(tài)材料的轉(zhuǎn)化可以有效地解決遺傳育種童期漫長的難題。本研究以chit42基因為目標(biāo)基因，以柑橘成年態(tài)節(jié)間莖段為外植體，研究了其再生和轉(zhuǎn)化體系。主要研究結(jié)果如下： 1.

2、優(yōu)化了柑橘實生態(tài)上胚軸再生和轉(zhuǎn)化體系，確定了 MS 附加 lmg/16-BA的培養(yǎng)基適合于枳殼的萌發(fā)；25 天苗齡的外植體轉(zhuǎn)化再生頻率最高；篩選抗性芽的適宜卡那霉素濃度為75mg/L。試驗共得到了27棵試管苗，經(jīng)PCR檢測證實，其中 5 棵外源基因phyB和npt Ⅱ均有特異帶擴(kuò)增。 2.研究了成年態(tài)節(jié)間莖段的再生轉(zhuǎn)化體系，以切割成1cm長的材料，經(jīng)過改良的消毒方法，滅菌效果最佳；以MS附加3mg/L的BA作為紐荷爾和冰糖橙不定