人PRL-3基因的克隆表達及蛋白純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：從人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移病灶標本中提取總RNA，PCR擴增PRL-3基因，并在大腸桿菌中表達并純化表達蛋白。 方法：收集人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移標本，提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為eDNA，PCR擴增目的序列，T-A克隆于pMD-18T載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109株，提取質(zhì)粒，重組質(zhì)粒進行PCR、酶切鑒定，經(jīng)雙酶切后的PRL-3片段再次連接至原核表達載體pQE-31，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，篩選pQE-31-PRL-3重組質(zhì)粒，經(jīng)PCR、酶切與

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