粉紋夜蛾抗Bt Cry1Ac毒素細(xì)胞與敏感細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)組學(xué)初步分析.pdf

1、自1957年美國(guó)太平洋酵母公司生產(chǎn)出第一個(gè)蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis Bt)商品制劑以來(lái)，Bt殺蟲(chóng)劑作為一種對(duì)人畜安全、無(wú)環(huán)境污染、產(chǎn)量高、效果好的微生物殺蟲(chóng)劑，在農(nóng)、林及衛(wèi)生害蟲(chóng)的防治中發(fā)揮了重要作用，成為國(guó)內(nèi)外開(kāi)發(fā)應(yīng)用最成功的一種生物農(nóng)藥。但隨著它的廣泛使用和多種轉(zhuǎn)Bt基因植物的推廣，害蟲(chóng)已經(jīng)對(duì)Bt產(chǎn)生了明顯的抗藥性，因此如何治理好昆蟲(chóng)對(duì)Bt的抗性已成為害蟲(chóng)防治中的重要問(wèn)題。只有弄清楚昆蟲(chóng)抗性形成的分

2、子機(jī)制，才能制定出合理的抗性管理策略，延緩抗性的產(chǎn)生。 本實(shí)驗(yàn)室的前期工作已經(jīng)證明了粉紋夜蛾離體培養(yǎng)的細(xì)胞能夠?qū)t殺蟲(chóng)晶體蛋白CrylAc產(chǎn)生一定水平的抗性，而且細(xì)胞系對(duì)Bt抗性特點(diǎn)與蟲(chóng)體的類(lèi)似。因此本實(shí)驗(yàn)采用了對(duì)Bt CrylAc毒素十分敏感的BT1-TN-581細(xì)胞和同源的抗性細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，利用CrylAc毒素蛋白，經(jīng)過(guò)連續(xù)的，高強(qiáng)度的抗性篩選，采用雙向凝膠電泳和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，從蛋白質(zhì)水平上來(lái)揭示兩種細(xì)胞的差異。

3、 通過(guò)雙向電泳技術(shù)，得到了粉紋夜蛾對(duì)Bt CrylAc抗性細(xì)胞和敏感細(xì)胞的總蛋白質(zhì)電泳圖譜，以ImageMaster Elite 5.0v軟件來(lái)分析，發(fā)現(xiàn)CrylAc抗性細(xì)胞的總蛋白質(zhì)點(diǎn)平均為896個(gè)，敏感細(xì)胞的總蛋白質(zhì)點(diǎn)平均為838個(gè)。大部分蛋白分布在14-100KD之間，大部分蛋白的pI主要在4-9之間，酸性段和堿性段基本上沒(méi)有分離到蛋白質(zhì)點(diǎn)。挖取了細(xì)胞總蛋白圖譜中幾個(gè)重復(fù)性良好的蛋白質(zhì)點(diǎn)，將這些點(diǎn)進(jìn)行了肽質(zhì)指紋圖譜鑒定，通過(guò)通過(guò)M

4、ascot檢索蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，找到了幾個(gè)可能與其有同源性的蛋白質(zhì)，通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件的分析，在分值上和肽段的覆蓋率上最為接近的一個(gè)蛋白質(zhì)A為變形菌門(mén)γ-變形菌綱Idiomarina loihiensis L2TR的鞭毛驅(qū)動(dòng)蛋白(flagellar motor protein)，它與細(xì)菌質(zhì)膜上的蛋白具有一定程度的同源性。表明該蛋白質(zhì)可能是一種與細(xì)胞膜蛋白相似的蛋白。另外，對(duì)該點(diǎn)PMF的肽段分析發(fā)現(xiàn)該蛋白的1-44肽段與DNA甲酰氨基嘧啶-糖基化