羥基紅花黃色素A對(duì)高糖作用下視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的:探討羥基紅花黃色素A對(duì)高糖培養(yǎng)情況下微血管內(nèi)皮細(xì)胞(恒河猴脈絡(luò)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞)增殖及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)mRNA表達(dá)的影響。 方法:取體外培養(yǎng)的RF/6A細(xì)胞，分為NG+HO、NG+H18、NG+H37、NG+H73組(各組中均含有5.5mmol/L葡萄糖，HSYA的濃度分別為0、18、37、73mg/L)及HG+H0、HG+H18、HG+H37、HG+H73組(各組中均含有22mmol/L葡萄糖，HSYA的濃度分

2、別為0、18、37、73mg/L)。培養(yǎng)24h、48h、72h，分別使用噻唑鹽比色法(MTT)檢測(cè)細(xì)胞增殖的活性，并根據(jù)吸光度值計(jì)算對(duì)增殖抑制的抑制率。應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR)來檢測(cè)培養(yǎng)各組RF/6A細(xì)胞中VEGFmRNA的相對(duì)表達(dá)量，觀察羥基紅花黃色素A及高糖對(duì)RF/6A細(xì)胞中VEGFmRNA

3、的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，各組吸光度A值、VEGFmRNA相對(duì)含量比較數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-wayANOVA)，并采用LSD法進(jìn)行兩兩比較，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果 1.光學(xué)顯微鏡觀察HSYA對(duì)RF/6A細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：HG+H0組與NG+H0組比較：RF/6A細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯加快；HG+H18、HG+H37、HG+H73組與HG+H0組比較，RF/6

4、A細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受抑制。 2.通過MTT檢測(cè)細(xì)胞吸光度值觀察HSYA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明： (1)培養(yǎng)48h、72h時(shí)，HG+H0組與NG+H0組相比吸光度值顯著增高(P<0.01)。 (2)HSYA作用24h，各高糖培養(yǎng)組吸光度值相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。HSYA作用48小時(shí)，HG+H37、HG+H73組細(xì)胞吸光度值均明顯低于HG+H0組(P<0.01)，隨著HSYA濃度的增加，各組吸光度值降

5、低。作用72h，HG+H18、HG+H37、HG+H73組細(xì)胞吸光度值均明顯低于HG+H0組(p<0.01)，隨著HSYA濃度的增加，各組吸光度值降低，HG+H73組抑制作用最明顯，其細(xì)胞吸光度值明顯低于HG+H18、HG+H37組(分別為p<0.01和p<0.05)。 (3)不同濃度的HSYA對(duì)正常糖濃度(5.5mmol/L)培養(yǎng)的RF/6A細(xì)胞的增殖無明顯抑制作用，各組細(xì)胞吸光度值比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。

6、 3.RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： (1)HG+H0組VEGFmRNA的表達(dá)明顯上調(diào)，與NG+H0組相比，其表達(dá)量在24h、48h、72h均明顯增高(p<0.01)。 (2)HSYA作用24h，各高糖培養(yǎng)組VEGFmRNA表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。作用48h，HG+H37、HG+H73對(duì)RF/6A細(xì)胞VEGFmRNA表達(dá)的抑制作用顯著，與HG+H0組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而作用72h，HG+H18、

7、HG+H37、HG+H73對(duì)高糖誘導(dǎo)的VEGFmRNA的表達(dá)均有抑制作用(p<0.01)，使高糖誘導(dǎo)的VEGFmRNA的表達(dá)下降到NG+H0組的表達(dá)水平(p>0.05)。 (3)不同濃度的HSYA對(duì)正常糖濃度(5.5mmol/L)培養(yǎng)的RF/6A細(xì)胞的VEGFmRNA的表達(dá)無明顯影響(p>0.05)。 結(jié)論 1.HSYA能夠抑制高糖培養(yǎng)誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，且呈時(shí)間-劑量依賴性；HSYA能夠下調(diào)高糖培