慢性丙型肝炎疫苗的初步研究及肝硬化的實(shí)驗(yàn)治療.pdf

1、慢性病毒性肝炎和肝硬化是威脅人類健康的兩種最主要的肝臟疾病。由于乙型肝炎疫苗的發(fā)明和普及應(yīng)用，丙型肝炎在慢性病毒性肝炎的發(fā)病中發(fā)揮越來越重要的作用。因此，丙型肝炎的預(yù)防和肝硬化的治療成為肝病學(xué)者面臨的兩個(gè)最重要的任務(wù)。本文對(duì)這兩個(gè)重要問題進(jìn)行了初步的探討。第一部分：雙鏈RNA和HCVNS3蛋白免疫小鼠可增強(qiáng)細(xì)胞免疫反應(yīng)背景和目的：雙鏈RNA是病毒復(fù)制過程中細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的一種特殊的RNA分子，它可以通過To11蛋白樣受體3通道來誘導(dǎo)機(jī)體抗病

2、毒免疫。HCVNS3蛋白與HCV的免疫逃逸有關(guān)，也是抗HCV感染免疫的主要目標(biāo)之一。方法：小鼠用NS3重組蛋白(rNS3)和poly(I：C)混合并與MontanideISA720(M720)乳化后免疫小鼠。小鼠脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子的產(chǎn)生用ELISPOT方法檢測(cè)，CD4+IFN-γ+T輔助細(xì)胞和CD8+IFN-γ+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)?？?HCVNS3抗體效價(jià)及IgG2a乖IgG1的含量用ELISA方法檢測(cè)。結(jié)果

3、：細(xì)胞因子產(chǎn)生情況的分析表明，用rNS3與poly(I：C)和M720復(fù)合疫苗可以誘導(dǎo)更多的IFN-γ分泌細(xì)胞，數(shù)倍于IL-4分泌細(xì)胞，證明該疫苗可以誘導(dǎo)Th1主導(dǎo)的免疫反應(yīng)。而不加poly(I：C)的rNS3與M720復(fù)合疫苗可以誘導(dǎo)Th2主導(dǎo)的免疫反應(yīng)。rNS3與poly(I：C)和M720復(fù)合疫苗誘導(dǎo)的IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)量顯著多于僅用rNS3、rNS3與M720乳化或rNS3與poly(I：C)混合疫苗免疫者，而與用rNS3與C

4、pG和M720復(fù)合疫苗誘導(dǎo)的IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù)量相當(dāng)。另外，rNS3與poly(I：C)和M720復(fù)合疫苗誘導(dǎo)的CD8+IFN-γ+T細(xì)胞百分比與rNS3與CpG和M720復(fù)合疫苗所誘導(dǎo)的相當(dāng)，這種CD8+T細(xì)胞免疫反應(yīng)可以持續(xù)7個(gè)月以上。結(jié)論：Poly(I：C)與rNS3和M720復(fù)合疫苗可通過交叉啟動(dòng)誘導(dǎo)強(qiáng)而持久的CTL反應(yīng)和Th1主導(dǎo)的免疫反應(yīng)。本研究提出了一種深具潛力的疫苗，它可以在小鼠實(shí)驗(yàn)中誘導(dǎo)增強(qiáng)的抗HCV細(xì)胞免疫，有發(fā)展

5、為臨床應(yīng)用的HCV疫苗的潛力。 第二部分：細(xì)菌膠原酶門靜脈灌注逆轉(zhuǎn)兔實(shí)驗(yàn)性肝硬化 背景和目標(biāo)：肝硬化的消退與肝內(nèi)膠原降解酶活性升高有關(guān)。本文試圖研究通過門靜脈補(bǔ)充膠原酶是否可延緩肝硬化的形成，并逆轉(zhuǎn)已形成的肝硬化。 方法：實(shí)驗(yàn)使用35只雄性新西蘭白兔，然而，由于門靜脈插管手術(shù)及以后的感染導(dǎo)致的死亡，僅有15只兔(43％)完成實(shí)驗(yàn)。4只兔作為正常對(duì)照(I組)給予CCl4皮下注射12周，然后行門靜脈生理鹽水灌注12周

6、。4只兔先皮下注射CCl46周，此后6周給予膠原酶門靜脈灌注，6mg每周兩次，同時(shí)也給予CCl4皮下注射(Ⅱ組)。4只兔先皮下注射CCl412周，再行膠原酶門靜脈灌注12周(Ⅲ組)，另3只兔作為對(duì)照組，先皮下注射CCl412周，再行生理鹽水門靜脈灌注12周(Ⅳ組)。結(jié)果：經(jīng)過12周的CCl4注射，用膠原酶治療的Ⅱ組肝羥脯氨酸含量(361.1±106.6μg/g)顯著低于尚未應(yīng)用膠原酶的Ⅲ+Ⅳ組(589.0±162.9μg/g；P＜0.0

7、5)。應(yīng)用膠原酶灌注12周后，Ⅲ組動(dòng)物肝羥脯氨酸含量(177.5±35.6μg/g)顯著低于用生理鹽水灌注的對(duì)照組(Ⅳ組)(446.3±150.1μg/g；P＜0.01)。肝臟組織學(xué)檢查也顯示經(jīng)膠原酶治療后肝硬化完全消退。肝、腎、肺、腦、心組織學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)膠原酶的毒性反應(yīng)。有2只兔發(fā)生過敏反應(yīng)，一只死亡。結(jié)論：本研究提供了“原則性證據(jù)”表明門靜脈灌注膠原酶可以延緩?fù)肅Cl4模型肝硬化的形成，并可逆轉(zhuǎn)已形成的肝硬化。目前臨床應(yīng)用條件尚不成