TPGS2k-PLGA納米粒逆轉(zhuǎn)肺腺癌細(xì)胞多藥耐藥效應(yīng)及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　維生素E的水溶性衍生物(TPGS)是一種高效的乳化劑、增溶劑、吸收促進(jìn)劑，不僅可以提升納米材料的包封率，還可以控制藥物釋放，同時(shí)在納米顆粒表面構(gòu)成空間位阻，對(duì)納米顆粒起到保護(hù)作用。新型TPGS(TPGS2k)在維持高效的乳化作用的同時(shí)，加長(zhǎng)的親水側(cè)鏈更有利于藥物酸性環(huán)境的釋放，維持納米粒穩(wěn)定，延長(zhǎng)循環(huán)滯留時(shí)間，降低肝臟蓄積。TPGS2k所攜帶的親酯性的維生素E(α-TOS)頭部，被認(rèn)為是P-糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥的抑制劑

2、，廣泛用于多藥耐藥逆轉(zhuǎn)的研究。
　　目的：
　　本研究采用mPEG2k和α-TOS為材料合成TPGS2k，使用合成的TPGS2k為乳化劑，進(jìn)一步修飾PLGA納米顆粒，并加載模式藥物SN-38。對(duì)合成的納米顆粒進(jìn)行必要的理化表征，并探究其對(duì)耐藥細(xì)胞株的抗癌效應(yīng)。同時(shí)，從攝取、外排、耗氧等方面，初步探究修飾后的納米材料的作用機(jī)制。
　　方法：
　　材料制備:參照公開(kāi)發(fā)表的方法合成TPGS2k，并進(jìn)行傅里葉紅外和核磁共

3、振檢測(cè)，進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。使用合成TPGS2k，利用乳化溶劑揮發(fā)法合成納米粒，并采用掃描電子顯微鏡、動(dòng)態(tài)光散射儀、X射線(xiàn)衍射儀、差示掃描量熱等進(jìn)行形態(tài)和理化確認(rèn)。利用紫外分光光度法對(duì)納米顆粒的載藥率、包封率和體外釋放進(jìn)行檢測(cè)。
　　安全性評(píng)價(jià):利用WST-1試劑盒檢測(cè)TPGS2k和納米粒對(duì)細(xì)胞生存能力的影響，使用AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒進(jìn)行凋亡檢測(cè)，探究材料所引發(fā)的細(xì)胞死亡是由毒性引發(fā)還是由凋亡所引起。
　　機(jī)理研

4、究:制備載香豆素-6的納米顆粒，同游離香豆素-6進(jìn)行對(duì)比，使用共聚焦顯微鏡觀察材料的入胞情況。制備載羅丹明-123的納米顆粒，同游離的羅丹明-123進(jìn)行對(duì)比，使用共聚焦顯微鏡觀察材料對(duì)外排作用的影響。使用透射電鏡觀察納米粒對(duì)細(xì)胞和線(xiàn)粒體形態(tài)的影響，使用XF96線(xiàn)粒體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)納米粒對(duì)細(xì)胞耗氧的影響。
　　結(jié)果：
　　1.傅里葉紅外和核磁共振結(jié)果顯示，本研究成功合成了TPGS2k。使用TPGS2k修飾的PLGA納米粒，表面

5、光滑，無(wú)團(tuán)聚現(xiàn)象，粒徑分布較均勻，大都在100納米左右。XRD和DSC證明了納米粒的成功合成和藥物的非晶體形態(tài)。納米粒包封率為83.6％，載藥率為7.35％，均達(dá)到了較高水平。體外藥物釋放顯示，在酸性環(huán)境下釋放較好，并且可以實(shí)現(xiàn)藥物的持續(xù)釋放可避免毒副作用。
　　2.WST-1實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各處理組細(xì)胞生存率均超過(guò)70％，達(dá)到了較高水平，表明材料毒性較低。AnnexinⅤ-FITC/PI檢測(cè)結(jié)果顯示，材料所引起的細(xì)胞死亡，大都以細(xì)

6、胞凋亡形式引發(fā)，進(jìn)一步印證了材料的安全性。
　　3.通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察，納米粒能夠增加細(xì)胞攝?。?h時(shí)提高141.5％），同時(shí)抑制P-gp對(duì)底物的外排。進(jìn)一步研究表明，納米顆粒逆轉(zhuǎn)P-g介導(dǎo)的多藥耐藥，與影響線(xiàn)粒體形態(tài)，干擾線(xiàn)粒體功能，抑制線(xiàn)粒體有氧呼吸，降低能量產(chǎn)生等有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　本研究成功合成了TPGS2k并制備了TPGS2k修飾的PLGA納米粒(TPGS2k/PLGA NPs、TPGS2k/PLGA/