RNA干擾逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：采用RNA干擾技術(shù)逆轉(zhuǎn)人卵巢癌OVCAR8/TR細(xì)胞中多藥耐藥基因，探討該技術(shù)能否有效地抑制多藥耐藥基因MDR1的表達(dá)，降低該基因編碼的糖蛋白P-gp的水平，以期恢復(fù)耐藥細(xì)胞對化療藥物的敏感性。 方法：設(shè)計(jì)合成針對MDR1的小片段RNA(siRNA)，將合成的siRNA用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染具有多藥耐藥基因MDR1高表達(dá)的人卵巢癌泰素耐藥細(xì)胞株OVCAR8/TR，用熒光定量RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間點(diǎn)的MDR1的mRNA的變

2、化，流式細(xì)胞儀定量測定轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間點(diǎn)P-gp表達(dá)的情況，ATP生物發(fā)光法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞對順鉑、5-氟脲嘧啶、阿霉素和泰素四種化療藥物敏感性的變化。 結(jié)果：1.MDR1的siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24、48、72、96、120小時(shí)后，熒光定量RT-PCR檢測的MDR1的mRNA的量與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比分別減少了26.42％、84％、78.43％、45.85％、0％，在轉(zhuǎn)染后的48小時(shí)基因的抑制達(dá)最高，以后則逐漸回升，在轉(zhuǎn)染的第五天回到正常水

3、平。陰性對照組mRNA的量與未轉(zhuǎn)染組的mRNA的量無差異。 2.轉(zhuǎn)染后的24、48、72、96、120小時(shí)，流式細(xì)胞儀定量測定的蛋白抑制率分別為16.71％、49.64％、85.23％、65.98％、9.44％，在轉(zhuǎn)染后的72小時(shí)其蛋白的抑制最強(qiáng)，至第五天時(shí)恢復(fù)接近正常水平，陰性對照組蛋白表達(dá)與未轉(zhuǎn)染組的蛋白表達(dá)無差異。 3.ATP生物發(fā)光法藥敏檢測顯示，OVCAR8/TR細(xì)胞對5-氟脲嘧啶敏感，而對順鉑、阿霉素和泰素均

4、不敏感，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞能夠明顯提高對泰素和阿霉素的敏感性，而對順鉑的耐藥性則無改變。泰素對細(xì)胞的抑制率由轉(zhuǎn)染前的26％提高到78％，阿霉素對細(xì)胞的抑制率則由轉(zhuǎn)染前的37％提高到58％。單用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組的藥敏結(jié)果與未轉(zhuǎn)染組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示卵巢癌細(xì)胞中存在有RNA干擾現(xiàn)象，siRNA能夠有效地抑制多藥耐藥基因MDR1的mRNA和P-gp的表達(dá)，也能夠恢復(fù)通過P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)的化療藥物的敏感性。RNA干擾能夠逆轉(zhuǎn)人卵巢癌化