過(guò)敏性紫癜外周血單個(gè)核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子T-bet Mrna、GATA-3 Mrna的表達(dá).pdf

1、目的:過(guò)敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura HSP)是一種可累及全身多個(gè)器官的小血管炎,兒童多見(jiàn),屬變應(yīng)性系統(tǒng)性小血管炎,以廣泛的小血管炎為病理基礎(chǔ),皮膚紫癜、腹痛、便血、關(guān)節(jié)痛和尿蛋白等癥狀為其主要臨床特征。HSP病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。感染、食物、藥物等均可以作為致敏因素,使具有敏感素質(zhì)的個(gè)體產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng),從而造成一系列損傷。
　　 HSP是一種由免疫介導(dǎo)的全身性血管炎,近年來(lái)的基礎(chǔ)及臨床研究發(fā)現(xiàn)

2、,HSP患者血清中IgA水平升高,而且血管壁有IgA免疫復(fù)合物(IgA-IC)沉積,提示本病的發(fā)病與IgA介導(dǎo)的免疫反應(yīng)有關(guān),目前通常認(rèn)為這種高免疫球蛋白血癥是患者B淋巴細(xì)胞多克隆活化的結(jié)果,形成大量IgA免疫復(fù)合,沉積在全身小血管壁而致血管炎,可累及多臟器出現(xiàn)各種臨床表現(xiàn)。Th細(xì)胞分化決定免疫應(yīng)答的性質(zhì)。Th1細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞免疫,增強(qiáng)吞噬細(xì)胞介導(dǎo)的抗感染機(jī)制;Th2細(xì)胞促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和產(chǎn)生抗體,而增強(qiáng)B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答。因此

3、其發(fā)病機(jī)制多認(rèn)為與T細(xì)胞亞群功能紊亂有關(guān)。
　　 Th1、Th2亞群在免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵的作用。細(xì)胞分化需要轉(zhuǎn)錄因子家族的精密控制。免疫系統(tǒng)中,CD4+輔助性T細(xì)胞可分化為不同的細(xì)胞譜系,Th1、Th2、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17。轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3是決定Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞或Th2細(xì)胞分化的兩個(gè)關(guān)鍵且特異性轉(zhuǎn)錄因子。T-bet和其他T-box家族成員具有高度保守的T-box DNA結(jié)合功能域。這一結(jié)構(gòu)域是大分子的,

4、由189個(gè)氨基酸組成。免疫系統(tǒng)中,Th1細(xì)胞分化需要T-bet,并且關(guān)于T-bet在Th1細(xì)胞分化中作用的研究很多。GATA-3轉(zhuǎn)錄因子是GATA家族的主要成員。GATA-3是TH2細(xì)胞分化的主要調(diào)節(jié)因子,這廣為所知。如果在免疫系統(tǒng)中選擇性刪除GATA-3,TH2細(xì)胞將不能形成。這充分說(shuō)明了GATA-3在TH2細(xì)胞分化中的重要作用。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)T-bet、GATA-3 mRNA在HSP患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(

5、Peripheral blood mononuclear cells PBMC)中的表達(dá),分析其在發(fā)病機(jī)制中所發(fā)揮的作用和意義。
　　 實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種基于傳統(tǒng)PCR檢測(cè)方法上的新技術(shù),在實(shí)時(shí)熒光定量PCR的過(guò)程中,靶序列的擴(kuò)增與熒光信號(hào)的檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行,全程定量PCR儀都采集熒光信號(hào),分析軟件在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后按數(shù)學(xué)算法自動(dòng)扣除熒光本底信號(hào)并且設(shè)定閾值從而得到每個(gè)樣品的Ct值。它有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,具有高特

6、異性和可靠性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定,重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。
　　 方法:32例過(guò)敏性紫癜患者均來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門(mén)診,其中男14例,女18例。其中14例為單純皮膚組(僅有皮疹)18例為混合組(有關(guān)節(jié)、消化道癥狀或累計(jì)腎臟中的一項(xiàng)或多項(xiàng))平均年齡(26.9±0.5)歲,病程2天-1年。起疹前有明確感染史者14人,無(wú)感染史者18人?；颊呓M入選標(biāo)準(zhǔn):(1)具有典型皮膚紫癜表現(xiàn),伴或不伴腹痛及關(guān)節(jié)痛、血尿等癥狀,血小板計(jì)數(shù)、功能及凝血相關(guān)

7、檢查正常;(2)未合并自身免疫性疾病、過(guò)敏性疾病、腫瘤和其他嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病;(3)受試前1月內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素或其他影響全身免疫功能的藥物。對(duì)照組:15例健康人群,均無(wú)過(guò)敏性疾病、自身免疫性疾病及家族史。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,患者組性別、年齡與對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。研究對(duì)象抽取外周靜脈血,采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中T-bet mRNA,GATA-3 mRNA的表達(dá)狀況。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)

8、性檢驗(yàn)以明確資料的總體分布類型,正態(tài)分布數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示(x±s),組間比較采用t檢驗(yàn);非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用中位數(shù)(四分位間距)表示[Md(Interquartile Range)],組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1與正常對(duì)照組相比,HSP患者T-bet mRNA的表達(dá)水平降低(△Ct值的平均秩次值,HSP患者27.70,正常對(duì)照組16.10,單側(cè)檢驗(yàn)P＜0.

9、05),GATA-3 mRNA的表達(dá)水平升高(△Ct值平均秩次值HSP患者18.25,正常對(duì)照組36.27,單側(cè)檢驗(yàn)P＜0.05)。
　　 2 HSP患者中,混合組和單純組皮膚組比較,T-bet mRNA的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(△Ct值的平均秩次值,IISP單純皮膚組15.86,混合組17.00,單側(cè)檢驗(yàn)P＞0.05),HSP混合組GATA-3 mRNA的表達(dá)水平升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(HSP單純皮膚組3.11±0.63,混合組2.2