姜辣素在新型水貂嘔吐模型的作用及機制.pdf

1、目的：嘔吐是胃內(nèi)容物返入食道，經(jīng)口吐出的一種反射動作。嘔吐可將進入胃內(nèi)的有害物質(zhì)吐出，是機體的一種防御性反射，有一定保護作用。但多數(shù)情況下，嘔吐是一種存在于多種疾病或條件下的難以忍受的癥狀。一般分為反射性、中樞性、前庭障礙性、神經(jīng)官能性四大類嘔吐，涉及幾十種疾病，尤其是癌癥放化療可誘發(fā)患者出現(xiàn)頻繁劇烈的嘔吐，引起脫水、電解質(zhì)平衡紊亂等并發(fā)癥，使病人的生活質(zhì)量明顯下降，影響了癌癥患者治療的依從性。因此，如何有效防治放、化療嘔吐成為多國科學(xué)

2、家研究的重要課題。
　　 現(xiàn)臨床止吐藥主要是化學(xué)類藥物，如組胺、膽堿、多巴胺、SP等受體拮抗劑，作用靶點單一，副作用大，亟需探索天然、低毒、廣譜、多靶點止吐藥。
　　 姜辣素（gingerols）是生姜中主要活性成分，探討姜辣素止吐作用及其機制，可為揭開生姜止吐之謎和創(chuàng)制新型止吐藥物提供新思路。
　　 本文運用新型水貂嘔吐模型和經(jīng)典大鼠異嗜模型，從中樞和外周兩個角度，器官和細胞兩個水平，從三個方面研究姜辣素作用機

3、制：①姜辣素在水貂急性嘔吐模型的作用及對5-HT、DA及SP表達的影響；②姜辣素在水貂延遲性嘔吐模型的作用及對NK1受體表達的影響：③姜辣素在大鼠異嗜模型的作用及對c-fos、NK1受體及膽囊收縮素(CCK)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、胃動素(MTL)的影響。
　　 方法：
　　 1．姜辣素在水貂急性嘔吐模型的作用及對5-HT、DA及SP表達的影響：
　　 將水貂隨機分為6組(n=6)：①空白對照組、②模型對

4、照組、③恩丹西酮陽性對照組、④姜辣素小劑量組、⑤姜辣素中劑量組、⑥姜辣素大劑量組。觀察順鉑注射后6h內(nèi)的嘔吐指標(biāo)，包括嘔吐潛伏期，干嘔，嘔吐次數(shù)。并在6h觀察期結(jié)束后，取極后區(qū)腦組織及距幽門20cm處回腸組織，采用高效液相色譜法測定外周及中樞5-HT及DA表達，免疫組化方法測定外周及中樞SP表達。
　　 2．姜辣素在水貂延遲性嘔吐模型的作用及對NK1受體表達的影響：
　　 分組與給藥同前，觀察順鉑給藥后72h內(nèi)的嘔吐指標(biāo)

5、，記錄干嘔次數(shù)及嘔吐次數(shù)。72h觀察期結(jié)束后，取極后區(qū)腦組織及距幽門20cm處回腸組織，采用免疫組化方法及Western-blot方法測定姜辣素對水貂外周及中樞NK1受體表達水平的影響。
　　 3．姜辣素在大鼠異嗜模型的作用及對c-fos、NK1受體、CCK、CGRP、MTL的影響：
　　 將大鼠隨機分為8組(n=6)：①正常動物+生理鹽水組、②正常動物+姜辣素組、③模型對照組、④阿瑞吡坦對照組、⑤恩丹西酮對照組、⑥姜辣

6、素小劑量組、⑦姜辣素中劑量組、⑧姜辣素大劑量組。觀察各組給藥后72h內(nèi)異嗜高嶺土行為，每6小時觀察和記錄大鼠進食高嶺土量。在72h觀察期結(jié)束后腹主動脈取血，并立即分別截取大鼠極后區(qū)腦組織和距幽門15cm處的回腸組織。分別采用免疫組化方法測定姜辣素對外周及中樞c-fos表達的影響；RT-PCR方法測定姜辣素對外周及中樞NK1受體表達的影響；放免法測定姜辣素對血漿CCK、CGRP、MTL表達的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1．

7、姜辣素在水貂急性嘔吐模型的作用及機制研究：
　　 順鉑給藥(ip)后，模型組6只水貂6h內(nèi)均發(fā)生嘔吐，嘔吐潛伏期短，干嘔和嘔吐次數(shù)均增多；而姜辣素大、中、小三個劑量組干嘔及嘔吐次數(shù)均減少，嘔吐潛伏期增加，與模型對照組比較差異顯著(P＜0.01)；姜辣素大劑量組與止吐陽性藥恩丹西酮組相同。
　　 免疫組化和高效液相結(jié)果表明：模型對照組水貂外周回腸組織及中樞極后區(qū)腦組織中5-HT、DA及SP水平均升高(P＜0.01)。而姜辣

8、素大、中、小三個劑量組外周回腸組織及中樞極后區(qū)腦組織的5-HT、DA及SP水平均降低，與模型對照組比較有差異(P＜0.05)；而恩丹西酮對照組極后區(qū)腦組織中5-HT水平也降低(P＜0.01)；但是對回腸組織中升高的5-HT水平無降低作用（P＞0.05）；同時恩丹西酮對照組對回腸組織和極后區(qū)腦組織中升高的DA及SP表達無降低作用（P＞0.05）。
　　 2．姜辣素在水貂延遲性嘔吐模型的作用及機制研究：
　　 順鉑給藥(ip

9、)后，模型對照組水貂在24h急性嘔吐期和24-72h延遲性嘔吐期均有干嘔和嘔吐反應(yīng)。姜辣素大、中、小三個劑量在24h急性嘔吐期和延遲性嘔吐期干嘔及嘔吐次數(shù)均減少(P＜0.01)。恩丹西酮對照組干嘔及嘔吐次數(shù)在24h急性嘔吐期均有減少(P＜0.05），在延遲期與模型對照組相比無差異(P＞0.05)。
　　 免疫組化和Western-blot測定結(jié)果表明：水貂回腸組織與極后區(qū)腦組織中NK1受體表達增高(P＜0.01)；姜辣素大、中、

10、小三個劑量組較模型組NK1受體表達水平均降低(P＜0.01)，有劑量相關(guān)性(P＜0.05)，與恩丹西酮對照組相比也有差異(P＜0.01)。恩丹西酮對照組NK1受體免疫組化及Western-blot表達與模型對照組相比無差異（P＞0.05）。
　　 3．姜辣素在大鼠異嗜模型的作用及機制研究：
　　 順鉑給藥(ip)后，模型對照組大鼠有明顯異嗜高嶺土行為，在急性嘔吐期和延遲性嘔吐期高嶺土攝食量均增多（P＜0.01）。而姜辣素

11、大、中、小三個劑量組急性期和延遲期的嗜土量與模型對照組相比均減少(P＜0.01)。與陽性止吐藥恩丹西酮對照組相比，姜辣素大劑量組在24h急性嘔吐期嗜土量無差異（P＞0.05）；但在24-72h延遲性嘔吐期姜辣素大、中、小三個劑量組嗜土量均減少（P＜0.05）。與阿瑞吡坦對照組相比，姜辣素三個劑量組在24h急性期和24-72h延遲期嗜土量減少作用均弱于阿瑞吡坦對照組。恩丹西酮對照組大鼠在急性期內(nèi)異嗜高嶺土量減少(P＜0.01)，但在延遲性

12、嘔吐期嗜土量與模型組相比無差異(P＞0.05)；阿瑞吡坦對照組在急性期和延遲性嘔吐期大鼠嗜土量均減少(P＜0.05）。
　　 免疫組化結(jié)果表明：模型對照組大鼠回腸組織和極后區(qū)腦組織c-fos表達增加(P＜0.05)；而姜辣素大、中、小三個劑量組外周及中樞組織中c-fos表達水平與模型對照組相比降低有差異(P＜0.05)，有劑量相關(guān)性(P＜0.05)；而姜辣素大、中、小三個劑量組外周和中樞組織中c-fos表達水平均低于恩丹西酮對照

13、組和阿瑞吡坦對照組(P＜0.05)。
　　 RT-PCR結(jié)果表明：模型對照組大鼠回腸組織和極后區(qū)腦組織NK1受體mRNA表達均增加(P＜0.05)；姜辣素大、中、小三個劑量組外周及中樞組織中NK1受體表達水平與模型對照組相比均有降低(P＜0.05)，有劑量相關(guān)性(P＜0.05)；與恩丹西酮對照組相比，姜辣素大、中、小三個劑量組外周及中樞組織中NK1受體表達水平均有降低(P＜0.05)；與阿瑞吡坦對照組相比無差異(P＞0.05)。

14、
　　 放射免疫結(jié)果表明：模型對照組大鼠血漿CCK、CGRP、MTL表達均有增加(P＜0.05)；而姜辣素大、中、小三個劑量組CCK、CGRP及MTL表達水平與模型對照組比較均降低(P＜0.05)，有劑量相關(guān)性(P＜0.05)；與恩丹西酮對照組和阿瑞吡坦對照組相比，其CCK、CGRP、MTL的表達也均有減少(P＜0.05）。
　　 1．用順鉑可制備水貂急性嘔吐模型，并可增加水貂急性嘔吐模型外周及中樞DA、5-HT及SP的

15、表達；姜辣素可抑制順鉑誘導(dǎo)的水貂急性期嘔吐反應(yīng)，并可抑制外周和中樞DA、5-HT及SP的異常表達。
　　 2．用順鉑可制備水貂延遲性嘔吐模型，并可增加其外周和中樞NK1受體的表達；姜辣素可抑制順鉑誘導(dǎo)的水貂延遲性嘔吐反應(yīng)，并抑制外周和中樞NK1受體的異常增高，有劑量相關(guān)性。
　　 3．用順鉑可制備大鼠異嗜模型，并可增加外周和中樞NK1受體、c-fos及血漿CCK、CGRP、MTL的表達；姜辣素可抑制順鉑誘導(dǎo)的大鼠異嗜模型