Nk1受體介導(dǎo)的姜辣素抗嘔吐作用研究.pdf

1、目的:生姜作為“嘔家圣藥”在我國應(yīng)用歷史悠久，可用于妊娠、術(shù)后及化療引起的嘔吐。姜辣素是從生姜中提取的活性成分，可對抗順鉑引起的嘔吐。本文應(yīng)用新型水貂嘔吐模型，開展對姜辣素抗阿撲嗎啡、洛哌丁胺和硫酸銅誘導(dǎo)的嘔吐作用及其機制的研究。
　　 方法:
　　 1.姜辣素在阿撲嗎啡誘導(dǎo)的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究將雄性水貂隨機分為:①空白對照組、②阿撲嗎啡組、③姜辣素低、中、高劑量組，每組6只?？瞻讓φ战M和阿撲嗎啡組分別給以生理鹽

2、水和1％西黃耆膠5ml·kg-1ig預(yù)處理;姜辣素低、中、高劑量組分別予姜辣素50mg·kg-1ig、100mg·kg-1ig、200mg·kg-1ig預(yù)處理。除空白對照組外，其余水貂在預(yù)處理30min后給予阿撲嗎啡0.5mg·kg-1sc，觀察水貂在給阿撲嗎啡后的嘔吐反應(yīng)，記錄嘔吐潛伏期，干嘔，嘔吐次數(shù)。2h觀察期結(jié)束后，處死水貂，取極后區(qū)，一部分置4％甲醛中固定，備測SP、c-fos的免疫組化表達;另一部分置于-80℃冰箱中冷凍，備

3、用Western-blot法檢測NK1受體表達。
　　 2.姜辣素在洛哌丁胺誘導(dǎo)的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究
　　 將雄性水貂隨機分為:①空白對照組、②洛哌丁胺組、③姜辣素低、中、高劑量組，每組6只?？瞻讓φ战M和洛哌丁胺組分別給以生理鹽水和1％西黃耆膠5ml·kg-1ig預(yù)處理;姜辣素低、中、高劑量組分別予以姜辣素50mg·kg-1ig、100mg·kg-1ig、200mg·kg-1ig預(yù)處理。除空白對照組外，其余水貂在

4、預(yù)處理30min后給予洛哌丁胺0.5mg·kg-1sc，觀察水貂在給洛哌丁胺后的嘔吐反應(yīng)，記錄嘔吐潛伏期，干嘔，嘔吐次數(shù)。觀察2h后，處死水貂，取極后區(qū)，備測SP、c-fosNK1受體表達。
　　 3.姜辣素在硫酸銅誘導(dǎo)的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究將雄性水貂隨機分為:①空白對照組、②硫酸銅組、③姜辣素低、中、高劑量組，每組6只?？瞻讓φ战M和硫酸銅組分別給以生理鹽水和1％西黃耆膠5ml·kg-1ig預(yù)處理;姜辣素低、中、高劑量組分

5、別用姜辣素50mg·kg-1ig、100mg·kg-1ig、200mg·kg-1ig預(yù)處理。除空白對照組外，其余水貂在預(yù)處理30min后給予硫酸銅40mg·kg-1ig，2h觀察期內(nèi)記錄嘔吐潛伏期，干嘔，嘔吐次數(shù)。處死水貂，取極后區(qū)和回腸組織，一部分置4％甲醛中，備測SP、c-fos的免疫組化表達;另一部分置于-80℃冰箱中冷凍，備測NK1受體表達及cGMP、cAMP、IP3和DAG/DG的含量。
　　 結(jié)果:1.姜辣素在阿撲嗎

6、啡誘導(dǎo)的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究表明:
　　 皮下注射阿撲嗎啡后，阿撲嗎啡組6只水貂均發(fā)生嘔吐，嘔吐潛伏期短，干嘔及嘔吐次數(shù)均增加;而姜辣素低、中、高劑量組與阿撲嗎啡組比較，干嘔及嘔吐次數(shù)減少(26.5±2.1b，15.2±4.3b，9.2±11.7bvs31.7±12.5;3.7±0.5c，3.0±0.6b，2.0±0.9bvs4.7±0.8，bP＜0.01，cP＜0.05)，嘔吐潛伏期延長(50.7±5.7minvs29.

7、3±3.8bmin，bP＜0.01)，并有量效關(guān)系。
　　 免疫組化結(jié)果顯示:SP、c-fos免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物呈現(xiàn)棕黃色顆粒，在阿撲嗎啡組極后區(qū)陽性顆粒最多，著色最深，隨姜辣素劑量增大，陽性反應(yīng)顆粒減少，著色變淺，表達受到抑制。免疫組化陽性評分結(jié)果顯示，阿撲嗎啡組水貂腦組織極后區(qū)中SP、c-fos表達明顯增高，與空白對照組比較有差異(4.2±0.9avs0.7±0.5;4.5±1.2avs1.7±0.7，aP＜0.01);姜辣素

8、低、中、高劑量組SP、c-fos表達水平與阿撲嗎啡組比較降低(2.8±0.8b，2.3±0.5c，1.5±0.6cvs4.2±0.9;3.8±1.7，2.8±0.7b，2.0±0.9cvs4.5±1.2,bP＜0.05,cP＜0.01)。
　　 Western-blot檢測結(jié)果顯示:皮下注射阿撲嗎啡會引起水貂極后區(qū)NK1受體表達增高，姜辣素低、中、高劑量組均能抑制NK1受體表達，且隨劑量增加，抑制作用增強。半定量結(jié)果顯示:阿撲嗎

9、啡組NK1受體表達，與空白對照組比較有差異(0.70±0.08avs0.20±0.03，aP＜0.01);姜辣素低、中、高劑量組NK1受體表達水平，與阿撲嗎啡組比較降低(0.46±0.04b，0.39±0.05b，0.27±0.03bvs0.70±0.08，bP＜0.01)。
　　 2.姜辣素在洛哌丁胺誘導(dǎo)的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究表明:
　　 洛哌丁胺可成功復(fù)制水貂嘔吐模型，皮下注射洛哌丁胺后，洛哌丁胺組6只水貂均發(fā)

10、生嘔吐，嘔吐潛伏期短，干嘔及嘔吐次數(shù)均增加;而姜辣素具有明顯的抗嘔吐作用，姜辣素組水貂嘔吐潛伏期較洛哌丁胺組延長(45.2±12.7bminvs26.9±7.8min，bP＜0.01)。0-2h觀察期內(nèi)，姜辣素低、中、高劑量組干嘔和嘔吐次數(shù)較洛哌丁胺組顯著減少(30.5±4.3b,25.3±3.0b，20.0±2.5bvs51.7±13.2;4.5±1.0，3.7±0.5c，2.8±0.7bvs5.3±1.0,bP＜0.01,cP＜0.

11、05)。
　　 免疫組化染色顯示，SP、c-fos免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物在洛哌丁胺組極后區(qū)陽性顆粒最多，著色最深，而姜辣素組隨劑量增大，陽性反應(yīng)顆粒減少，著色變淺。免疫組化陽性評分結(jié)果顯示，洛哌丁胺使水貂極后區(qū)SP及c-fos表達增加(3.3±0.5avs0.7±0.5;3.7±0.5avs0.3±0.5，aP＜0.01)姜辣素低、中、高劑量組水貂極后區(qū)SP及c-fos表達顯著少于洛哌丁胺組(2.3±0.5b，1.7±0.5b，0.8

12、±0.4bvs3.3±0.5;3.2±0.7，2.7±0.5b，1.5±0.6bvs3.7±0.5，bP＜0.01)。
　　 Western-blot檢測結(jié)果顯示:與空白對照組比，洛哌丁胺組水貂極后區(qū)NK1受體表達增高(0.63±0.04avs0.16±0.04，aP＜0.01);姜辣素低、中、高劑量組NK1受體表達水平與洛哌丁胺組比降低(0.39±0.03b，0.32±0.05b，0.24±0.06bvs0.63±0.04，b

13、P＜0.01)。
　　 3.姜辣素在硫酸銅誘導(dǎo)的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究表明:
　　 硫酸銅40mg·kg-1灌胃后水貂有明顯的干嘔和嘔吐反應(yīng)。與硫酸銅組相比，姜辣素組水貂嘔吐潛伏期延長，干嘔及嘔吐次數(shù)減少(22.3±2.1b，18.5±1.4b，7.5±1.5bvs31.5±2.5;4.8±0.7c，4.0±0.6b，2.3±0.8bvs6.3±1.2bP＜0.01，cP＜0.05)。
　　 免疫組化方法顯示

14、:SP免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物在硫酸銅組回腸組織和極后區(qū)陽性顆粒最多，著色最深，而隨姜辣素劑量增大，陽性反應(yīng)顆粒減少，著色變淺。免疫組化陽性評分結(jié)果顯示，硫酸銅組水貂回腸組織和極后區(qū)SP表達明顯增加(3.0±0.6avs0.7±0.5;2.5±0.5avs0.5±0.5，aP＜0.01)，而姜辣素低、中、高劑量組回腸及極后區(qū)SP表達水平，與硫酸銅組比較降低(2.3±0.5，1.5±0.5b，1.3±0.5bvs3.0±0.6;2.2±0.4，1

15、.3±0.5b，0.8±0.4bvs2.5±0.5，bP＜0.01)。
　　 免疫組化陽性評分結(jié)果顯示，硫酸銅組水貂回腸組織和極后區(qū)c-fos表達明顯增加(3.1±0.7avs0.7±0.5;2.8±0.8avs0.5±0.5，aP＜0.01)，而姜辣素低、中、高劑量組外周及中樞組織中c-fos表達水平，與硫酸銅組比較降低(2.5±0.5，1.7±0.5b，1.4±0.4bvs3.1±0.7;2.4±0.6，1.7±0.8b，1

16、.2±0.4bvs2.8±0.8，bP＜0.01)。
　　 Western-blot檢測結(jié)果顯示:硫酸銅組水貂回腸和極后區(qū)NK1受體表達明顯增高，與空白對照組比較有差異(0.73±0.03avs0.32±0.04;0.52±0.03avs0.29±0.02，aP＜0.01);姜辣素低、中、高劑量組NK1受體表達水平，與硫酸銅組比較降低(0.55±0.03b，0.42±0.04b，0.32±0.04bvs0.73±0.03;0.4

17、7±0.03c，0.36±0.05b，0.31±0.05bvs0.52±0.03，bP＜0.01,cP＜0.05)。
　　 酶聯(lián)免疫法實驗結(jié)果表明:硫酸銅組水貂回腸組織與極后區(qū)腦組織中cGMP含量有明顯降低，與空白對照組比較有差異(26.82±5.93avs42.37±10.84;25.60±7.44avs40.18±12.03，aP＜0.01)。姜辣素低、中、高劑量組回腸與極后區(qū)cGMP含量較硫酸銅組均升高(35.43±6.2

18、6b，37.92±7.23b，40.50±7.25bvs26.82±5.93;32.62±8.55b，35.12±3.76b，39.48±5.93bvs25.60±7.44，bP＜0.01)。與空白對照組比較，模型組的cAMP、IP3和DAG/DG沒有統(tǒng)計學(xué)意義，與硫酸銅組相比，姜辣素組cAMP、IP3和DAG/DG水平未見顯著差異。
　　 結(jié)論:在水貂嘔吐模型，姜辣素可抑制阿撲嗎啡、洛哌丁胺、硫酸銅誘導(dǎo)的嘔吐，其機制與抑制了N