人DR5胞外區(qū)結(jié)構(gòu)和功能的初步探索.pdf

1、大量研究證明TRAIL誘導(dǎo)激活DR5可介導(dǎo)多種腫瘤細胞凋亡.但是近年來其他人和我們的研究均發(fā)現(xiàn),對于同一腫瘤細胞,經(jīng)TRAIL激活DR5可分別誘導(dǎo)細胞凋亡和細胞增殖兩種作用,但其機制仍然是個迷.本研究分別構(gòu)建了編碼F2、F4以及F3-F4融合的抗原表位(以F3-4表示)的重組表達載體,并在大腸桿菌中表達,獲得了純化的各重組多肽.研究這3種重組肽與rsTRAIL及抗DR5胞外區(qū)不同單克隆抗體的結(jié)合活性,以及它們競爭性抑制rsTRAIL誘導(dǎo)

2、腫瘤細胞凋亡的生物學活性,從而闡明DR5胞外區(qū)不同抗原表位與rsTRAIL和各單克隆抗體的相互作用、識別能力和生物學意義.取得了如下結(jié)果:(1)設(shè)計并分別克隆了編碼F2(71-174bp)、F4(245-396bp)和F3-4(175-396bp)抗原表位的重組表達載體,并在大腸桿菌中獲得表達;(2)經(jīng)誘導(dǎo)表達、超聲、離心和親和層析,獲得了純化的各重組多肽:(3)配體-受體飽和結(jié)合實驗和Scatchard作圖分析顯示,DR5胞外區(qū)上有高

3、、低兩個rsTRAIL結(jié)合位點,其高和低親和力結(jié)合位點的Kd值分別為6.62nmol/L和967nmol/L;重組抗原表位rF2和rF4肽段上分別含有1個rsTRAIL的結(jié)合位點,其中rF2上的結(jié)合位點的Kd值為20.2nmol/L,rF4上的結(jié)合位點的Kd值為981.3nmol/L;(4)抗原-抗體結(jié)合實驗表明,F2與具有高腫瘤殺傷活性的抗DR5胞外區(qū)單克隆2-10號抗體具有高親和力,F4與具有較弱腫瘤殺傷活性的2-03號抗體有高親和

4、力.上述結(jié)果提示TRAIL特異識別并結(jié)合的高、低親和力結(jié)合位點分別位于DR5胞外區(qū)的F2和F4.根據(jù)前期和本文的研究結(jié)果結(jié)合對DR5胞外區(qū)一級結(jié)構(gòu)的分析,推測:人DR5胞外區(qū)不同抗原表位具有不同的生物學功能,F1主要起保護的作用,F2是DR5胞外區(qū)的主要功能區(qū),在受體配體的結(jié)合中起關(guān)鍵作用,F3具有連接和維持空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的雙重作用,F4是輔助功能區(qū),在TRAIL的識別及配體受體的結(jié)合中有重要的作用;在rsTRAIL或抗DR5胞外區(qū)單克隆