人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化及內(nèi)皮樣細(xì)胞的特性研究.pdf

1、目的：通過研究在體外經(jīng)化學(xué)誘導(dǎo)劑對人大隱靜脈來源的血管內(nèi)皮細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行分離并向內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)，比較兩種來源內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性及細(xì)胞功能，分析作為種子細(xì)胞的可行性，為將來組織工程中的應(yīng)用提供一定的研究基礎(chǔ)。
　　 材料：在無菌狀態(tài)抽取該科手術(shù)患者胸骨骨髓10ml；取CABG術(shù)中剩余的大隱靜脈段。
　　 方法：采用膠原酶消化法在體外分離培養(yǎng)大隱靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(hECs)；用密度梯度離心法分離培養(yǎng)人骨髓間充

2、質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)，并在體外經(jīng)VEGF、bFGF及ECGF因子向內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)分化(hMSC-ECs)，觀察細(xì)胞前后生物學(xué)特征，描述細(xì)胞周期及生長曲線；流式細(xì)胞儀(FCM)測定分化細(xì)胞的誘導(dǎo)率；免疫組化鑒定細(xì)胞表面抗原標(biāo)志Vimentin及α-SMA，內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志抗原CD31、CD34、Ⅷ因子；并用Western blot方法測定Ⅰ型膠原蛋白，測定內(nèi)皮細(xì)胞功能指標(biāo)(NO，PGI2，ET-1及t-PA)，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較分析。

3、>　　 結(jié)果：人大隱靜脈來源的內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)初期生長增殖較慢，免疫組化染色示抗原CD34，CD31及Ⅷ因子陽性；人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)生長增殖速度快，呈成纖維細(xì)胞方向生長；免疫組化示表達(dá)Vimentin及α-SMA，誘導(dǎo)后還表達(dá)CD31，CD34及Ⅷ因子相關(guān)抗原。Western blot結(jié)果顯示三種細(xì)胞均有分泌Ⅰ型膠原蛋白的功能；測定細(xì)胞功能示：hECs組中ET-1及PGI2的含量明顯高于其余兩組的含量；三組中細(xì)胞t-PA的含量

4、無明顯差異；NO含量測定示，hECs組與hMSC-ECs組間無明顯差異卻均明顯高于hMSCs組。凍存復(fù)蘇后細(xì)胞各項特性功能無明顯變化。
　　 結(jié)論：分別來源于人大隱靜脈和骨髓組織的hECs、hMSCs在體外利用膠原酶消化法和密度梯度離心法可以成功進(jìn)行分離、培養(yǎng)及擴(kuò)增，且在體外條件下可成功向內(nèi)皮細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化，以hMSCs誘導(dǎo)前后生長能力和細(xì)胞功能均較強(qiáng)，即使年齡處于中老年階段者仍然能分離出足夠的細(xì)胞數(shù)，獲取較為簡便，且已基本具