人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：通過體外分離、培養(yǎng)及擴(kuò)增成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)特征，了解其檢測指標(biāo)和生長規(guī)律；研究人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的培養(yǎng)條件和鑒定指標(biāo)。 方法：體外分離、培養(yǎng)及擴(kuò)增人骨髓MSCs，用倒置光學(xué)顯微鏡、透射電鏡觀察人骨髓MSCs的形態(tài)特征和增殖狀況，用流式細(xì)胞儀檢測人骨髓MSCs表面抗原的表達(dá)。傳代至第三、四代，加入不同濃度5-氮雜胞苷(5-Azacyditine)，進(jìn)行不同時(shí)間

2、的孵育，用四甲基偶氮唑鹽比色法測定細(xì)胞的生長活性，確定最佳的濃度和孵育時(shí)間。四周后行電鏡，免疫組化染色及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測。 結(jié)果：人骨髓MSCs為成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，呈梭形貼壁生長。表面抗原CD44表達(dá)為陽性，CD14、CD34、CD45表達(dá)為陰性。選用5-Azacyditine濃度為10μmol/l，孵育時(shí)間為24h對人骨髓MSCs的增長活性抑制最小。誘導(dǎo)后細(xì)胞呈心肌樣細(xì)胞改變，電鏡下可見肌絲形成，部分細(xì)胞