腸球菌耐藥性及esp基因與糞腸球菌耐藥的相關(guān)性.pdf

1、目的：檢測腸球菌臨床分離株對(duì)6種抗菌藥物的敏感性，分析糞腸球菌臨床株的esp基因擴(kuò)增序列，以揭示腸球菌臨床株的耐藥現(xiàn)狀及esp基因與糞腸球菌耐藥的關(guān)系，為臨床合理選用藥物治療腸球菌感染提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。方法：從臨床實(shí)驗(yàn)室收集腸球菌感染標(biāo)本，進(jìn)行分純、培養(yǎng)、鑒定；用瓊脂平板稀釋法檢測去甲萬古霉素、氨芐西林、環(huán)丙沙星、阿奇霉素和紅霉素對(duì)腸球菌的最低抑菌濃度(MIC)及鑒定慶大霉素高濃度(MIC≥500μg/mL)耐藥株，篩選出對(duì)6種抗菌藥

2、物呈不同程度耐藥或多重耐藥的腸球菌。然后用PCR法擴(kuò)增糞腸球菌臨床株的esp基因；隨機(jī)挑選一陽性菌株，將其PCR產(chǎn)物克隆到pUC18載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，藍(lán)白斑篩選挑取陽性重組子進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切、PCR及測序鑒定，并對(duì)測序結(jié)果用Blast軟件進(jìn)行同源性分析，探討糞腸球菌耐藥與esp基因的關(guān)系。結(jié)果：從臨床分離的腸球菌共78株，其中糞腸球菌61株，占78.2％；屎腸球菌15株，占19.2％；鳥腸球菌、堅(jiān)韌腸球菌各1株，共占2.

3、6％。@2　　去甲萬古霉素對(duì)腸球菌的MIC50、MIC90分別為0.5μg/mL和4μg/mL；氨芐西林和環(huán)丙沙星的MIC50、MIC90分別為1μg/mL和4μg/mL、16μg/mL和64μg/mL；阿奇霉素和紅霉素的MIC50、MIC90較高，分別為16μg/mL和32μg/mL、64μg/mL和128μg/mL。未檢測出去對(duì)甲萬古霉素耐藥的腸球菌，腸球菌對(duì)氨芐西林、環(huán)丙沙星、高濃度慶大霉素、阿奇霉素和紅霉素的耐藥率分別為16.

4、7％、53.8％、56.4％、74.4％、85.9％?！　〖S腸球菌和屎腸球菌對(duì)氨芐西林的耐藥率分別為9.8％和46.7％(P＜0.01)；對(duì)環(huán)丙沙星的耐藥率分別為50.8％和73.3％(P＜0.05)，這兩種主要腸球菌對(duì)氨芐西林及環(huán)丙沙星的耐藥率的差別具有顯著性?！　∮肞CR法從61株糞腸球菌中共擴(kuò)增出26例esp基因呈陽性的菌株，esp基因陽性率為42.6％，將esp片段測序結(jié)果與GenBank登錄序列在堿基和核苷酸水平進(jìn)行同源性

5、比較，同源性達(dá)到99％。在對(duì)氨芐西林、環(huán)丙沙星、高濃度慶大霉素、紅霉素耐藥的糞腸球菌中，esp+率分別為33.3％、54.8％、70.6％、51.0％；敏感株中esp+率分別為43.6％、30.0％、7.4％、8.3％。氨芐西林敏感株中esp+率較耐藥株高(P＞0.05)，二者之間差別無顯著性意義。而在環(huán)丙沙星、紅霉素、高濃度慶大霉素耐藥株中esp+率高于敏感株(P＜0.05)，耐藥株與敏感株之間esp+率的差別均有顯著性意義。esp+

6、株對(duì)氨芐西林、環(huán)丙沙星、高濃度慶大霉素、紅霉素的耐藥率為7.7％、65.4％、92.3％、96.2％，esp-株的耐藥率為11.4％、40.0％、28.6％、68.6％；在對(duì)后三種抗菌藥物耐藥的esp+株與esp-株之中，耐藥率的差別有顯著性意義(P＜0.05)。esp+株對(duì)兩種和三種抗菌藥的耐藥率均為46.2％，對(duì)四種抗菌藥的耐藥率為7.6％；esp-株兩種抗菌藥的耐藥率為34.3％，對(duì)三種抗菌藥的耐藥率為2.9％，對(duì)四種抗菌藥的耐藥